利用基因芯片进行基因表达谱分析.pptVIP

标记方法 ? RNA 样本不扩增进行标记：在反转录的体 系中加入 Cy3 或 Cy5 标记过的 dNTP 类似物， 通过反转录酶的作用，标记新合成的 cDNA 。 这种实验方法效率较低，对 RNA 样本需求 量大，通常要 50 ～ 200μg 总 RNA ， 1 ～ 3μg mRNA ? RNA 样本扩增后进行标记 扩增 mRNA （ cRNA ）靶分子 ? 联合应用 cDNA 扩增和模板指导下的体外转录反应 来完成线性扩增。 ? PCR 方法： 同一用量和限制循环次数的条件下，通过 RT-PCR 可平行的扩增实验组和对照组的 RNA 样本以满足 实验要求并同时进行荧光标记。 扩增 mRNA （ cRNA ）靶分子 ? 基于 T7 的 mRNA 线性扩增：利用模板指导 下的体外转录反应来完成线性扩增。该方 法能从 1 ～ 50ng mRNA 分子出发扩增出足 够数量的 cDNA 靶分子。这种扩增方法更具 线性 合成 cDNA 二链 ? 在小鼠白血病病毒（ MMLV ）反转录酶的作用下， 反转录生产 cDNA 一链。 MMLV 反转录酶会在 cDNA 一链的 3 端加上非模板的寡聚 C 残基，这时 加入 3 端带有寡聚 G 的引物，可以结合到 cDNA 的 3 端，生成一小段双链的 cDNA ，再在 DNA 聚合 酶的作用下延伸形成 ? 加入 RNase H ，水解掉 RNA 模