马铃薯 茄子体细胞杂种的基因组组分及其青枯病抗性的遗传基础.pdfVIP

马铃薯+茄子体细胞杂种的基因组组分及其青枯病抗性的遗传基础 目录 摘 要 i Abstract iii 缩略词表 vi 1.前言 1 1.1 课题提出 1 1.2 文献综述 3 1.2.1 青枯菌简介 3 1.2.2 马铃薯青枯病研究进展 5 1.2.3 茄子青枯病研究进展 6 1.2.4 体细胞杂交在植物创制资源上的应用 8 体细胞杂交技术的提出和发展 8 体细胞杂交技术在马铃薯种质资源创新上的应用 8 体细胞杂交技术在马铃薯抗青枯病种质资源创制上的应用 9 1.2.5 基因组原位杂交（GISH ）在体细胞杂种遗传组成分析上的应用 10 1.2.6 染色体特异的细胞遗传学DNA 标记用于鉴定体细胞杂种中的染色 体缺失 11 1.2.7 利用转录组测序研究青枯病抗性相关基因的差异表达 14 2. 材料方法 15 2.1 植物材料 15 2.2 植物DNA 提取 15 2.3 SSR 标记的扩增与检测 16 2.4 染色体制片 16 2.4.1 根尖的固定 16 2.4.2 中期染色体制片 17 2.5 倍性测定 17 2.5.1 流式细胞仪测定倍性 17 2.5.2 染色体计数 17 2.6 原位杂交 18 I 华中农业大学2020 届博士学位论文 2.6.1 探针的标记 18 2.6.2 FISH 与GISH 18 2.7 青枯菌接种22 2.7.1 青枯菌的活化与培养22 2.7.2 试管苗青枯菌接种22 2.7.3 盆栽青枯病接种23 2.8 植物表型统计23 2.8.1 农艺性状调查23 2.8.2 花粉活力测定24 2.9 植物总RNA 的抽提以及RT-qPCR 24 3. 结果25 3.1 体细胞融合后代倍性检测25 3.1.1 流式细胞仪测定体细胞融合后代的倍性25 3.1.2 染色体压片计数确定体细胞融合后代倍性26 3.2 体细胞融合后代青枯病抗性评价31 3.2.1 试管苗青枯菌接种评价体细胞融合后代青枯病抗性31 3.2.2 体细胞融合后代PE68-1 栽培条件下的青枯病抗性34 3.2.3 PE68-1 注射接种青枯菌HZAU007 35 3.2.4 体细胞融合后代PE68-1 对不同毒力青枯菌菌株的抗性37 3.3 体细胞融合后代的遗传组成38 3.3.1 GISH 鉴定体细胞融合后代染色体组成38 3.3.2 马铃薯着丝粒重复序列检测体细胞融合后代中马铃薯染色体的缺 失41 马铃薯着丝粒重复序列在AC142 上的定位41 利用着丝粒特异重复序列体细胞融合后代鉴定染色体缺失44 3.3.3 茄子特异SSR 标记鉴定体细胞融合后代的基因组组成46 茄子特异SSR 引物的筛选46 茄子特异SSR 引物在体细胞融合后代中的扩增及保留情况47 茄子特异SSR 标记与体细胞杂种青枯