水溶性脂质体药物的冷冻干燥..docxVIP

实验三 水溶性脂质体药物的冷冻干燥 一．实验目的 1．掌握旋转蒸发法制备水溶性脂质体药物的方法； 2．学习脂质体药物冷冻干燥的工艺； 3．通过对冻干前后水溶性脂质体药物喃氟啶包封率的测定，了解不同保护剂、 不同冻结速率对脂质体冻干前后药物的包封率的影响。 二．实验设备 旋转蒸发仪、冷冻干燥机、高效液相色谱仪 三．实验方法与步骤 1．旋转蒸发法制备喃氟啶脂质体 以配制葡萄糖浓度为 5％的喃氟啶脂质体悬浮液为例：称取 2.0g 葡萄糖和 0.8g 喃氟啶，过筛（ 100 目）两次，使二者充分混合；称取 1.2g 大豆卵磷脂、 0.6g 胆固醇、0.4g 泊洛沙姆放入喷雾器内， 量取 10mL氯仿使喷雾器内的上述材料充分溶解； 把葡萄糖和喃氟啶的混合物放入包衣锅内， 使之旋转，用盛有膜材的喷雾器向包衣锅内喷膜材， 每 10min 喷两次，并用一暖风机吹向包衣锅， 使膜材中的有机溶剂挥发；喷雾器中的全部膜材喷完， 包衣锅继续运转 20min 后停止；把包衣锅内地的脂质体取出， 放入小瓶密封， 并放在干燥器内保存； 当需要使用时加蒸馏水时悬浮液体积为 40mL，这样便配制成葡萄糖浓度为 5％的喃氟啶脂质体悬浮液。 2．冷冻干燥过程 1）冻结过程。将实验物料放在冻干机的搁板上，插入热电偶，开始采集温度；接着开启冻干机，开始搁板制冷； 2）一次干燥过程。当物料完全冻结后，关闭搁板制冷，打开冷阱制冷；当冷阱温度降至 -40 ℃时，打开真空泵开始抽真空，并设定一次干燥温度。 3）二次干燥过程。当一次干燥过程结束时，设定二次干燥温度； 4）后处理。当二次干燥过程结束时，打开放气阀，关闭真空泵，取出物料用天平称量，然后进行封装处理； 3．脂质体药物包封率的测定 1）标准曲线绘制 2）游离喃氟啶含量 Cf 测定 将含有喃氟啶的脂质体悬浮液 500μl 放入离心柱中，把离心柱放入电动离 心机中离心，转速为 3000r/min 。取 6.5 μl 离心液放入 25ml 的容量瓶中，加甲醇至刻度线。用进样器取 10μl 已配好的溶液经进样阀进入色谱仪， 每个样品测两次。由喃氟啶浓度的标准曲线，可以算出游离的喃氟啶含量。（ 3）喃氟啶总含量 Ct 测定 取含有喃氟啶的脂质体悬浮液 6.5 μl 放入 25ml 的容量瓶中，加甲醇至刻度线使脂质体破坏，用进样器取 10μl 已配好的溶液经进样阀进入色谱仪， 每个样品测两次。 （ 4）包封率的计算 Ct C f En Ct 四．数据记录与处理 冻干后包封率 保护剂 冻干前包封率 慢速降温 快速降温 5％葡萄糖 10％葡萄糖 15％葡萄糖 5％蔗糖 10％蔗糖 15％蔗糖 5％甘露醇 10％甘露醇 15％甘露醇 5％海藻糖 5％海藻糖 5％海藻糖 五．思考题 1．药品冷冻干燥与其他干燥方式相比有哪些优点？ 2．药品冷冻干燥工艺中要控制哪几个参数？