病理科免疫组织化学技术员培训和技术操作规范方案.pdfVIP

. WORD格式 .资料 . 病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 一、病理科免疫组织化学技术员培训规范： 凡新入我科的病理技术员均需进行免疫组化理论知识的学习、培训，经考核合格、具备病理技术员技士资 质后方能从事免疫组织化学染色。 二、病理科免疫组织化学染色操作规范 1. 免疫组织化学染色前的准备事项 (一 ) 组织切片的制备 常规切片脱蜡至水（组织固定需用 10% 中性甲醛） (二 ) 抗体的选择、稀释和保存 （1）选择抗体应先了解其反应谱和适用条件 〔包括适用切片 (石蜡切片抑或冷冻切片 ) 、稀释度和温育时间 等〕。 （2 ）对于未曾使用过的新抗体，应按照有关说明书的提示，以几个不同的稀释度对适宜检材 ( 已知阳性切 片/ 涂片 )进行预试验 ;根据染色阳性表达的程度和检材背景着色程度，确定用于染色的最适稀释度 （3 ）抗体的原液应于分装后置于一 20 ℃冷室中保存，切勿反复冻存 ( 以免效价 降低 ) 。 （4 ）抗体的工作液可置于 4 ℃冰箱中保存。 （5 ）抗体的稀释。 (1) 一般用 0.01M PBS( 生理盐水磷酸盐缓冲液 ) ，pH 值 7.2 。 (2) 或用 0.05M TBS( 生理盐水三经基氨基甲烷缓冲液 ) ，pH 值 7.6 。 (3) 必要时可按需要加适量小牛血清清蛋白。 (三 ) 被检测组织内抗原的修复 （1）经 4% 中性甲醛之类含醛基固定剂固定的组织，其切片中的抗原决定簇因醛的交联作用而被封闭，从 而影响抗原一抗体反应。进行免疫组织化学染色前，对于组织切片进行抗原修复处理，会使组织中的固有 抗原尽量多地暴露出来，提升了大部分检测抗体的阳性率和反应强度。有的抗体不需要进行抗原修复。应 按抗体试剂说明书的提示决定是否进行被检测组织内的抗原修复。 （2 ）抗原修复缓冲液。 (l) 一般为 0.01M 柠檬酸缓冲液 (2.1g 柠檬酸溶于 100ml 蒸馏水中，用 2M NaOH 调节 pH 值至 6.0) 。 (2) 有些抗体需要特殊修复缓冲液，如高 PH 值的 EDTA(50mM Tris. ， 10mM EDTA ， pH9.0) ，或商品化的 该高 pH 修复液等。 专业 .整理 . WORD格式 .资料 . （3 ）抗原修复的常用方法。 (l) 胰蛋白酶消化法 : ①组织切片脱蜡、水化。 ②滴加一滴 0.1% 胰蛋白酶液于组织切片上。 ③ 37 ℃下温育 20-40min( 温育时间取决于组织经 4% 中性甲醛固定时间的长短和被检测抗原 ) 。 ④蒸馏水冲洗，终止反应。 ⑤阻断内源性过氧化物酶。 ⑥进行免疫组织化学染色。 （配制 0.1% 胰蛋白酶液时， 应将 0.1g 胰蛋白酶溶于 0.1% 无水氯化钙水溶 液 (pH 值 7.8) 中。） （2) 胃蛋白酶消化法 : ①组织切片脱蜡、水化 . ②滴加胃蛋白酶工作液于组织切片上。 ③ 37 ℃下温育 10-30min( 一般为 10min ，可延至 30min ，取决于组织经 4% 中性甲醛固定时间的长短 ). ④浸人蒸馏水，终止反应。 ⑤进行免疫组织化学染色。用 1%胰蛋白酶液 37 ℃下处理 20min 。( 应以 0.1M HCI 配制胃蛋白酶工 作液。过度的胃蛋白酶消化会使组织结构破坏、切片 脱落。 ) （3) 微波修复抗原法 : ①组织切片脱蜡、水化 (硅化玻片或经防脱片胶处理的玻片 ) 。 ②将组织切片置于容器 (塑料盒或玻璃缸 ) 中，并向其中加人抗原修复液 200ml ，盖上具有小孔的盖子。 ③将该容器置于微波炉 (705-800W) 中