药品生物检定技术 器具、试液准备及内毒素限值、最大有效稀释倍数确定 电子教案-知识点2：器具、试液准备及内毒素限值、最大有效稀释倍数确定.doc

《药品生物检定》教案 知识点 细菌内毒素检查前准备工作 学时 1学时 教学内容 器具、试液准备及内毒素限值、最大有效稀释倍数确定 教学重点 内毒素限值、最大有效稀释倍数确定 教学难点 内毒素限值、最大有效稀释倍数确定 参考资料 药品生物检定技术 主编：杨元娟 人民卫生出版社 药品生物检定技术 主编：赵卫峰 中国医药科技出版社 药品生物检定技术（第二版）主编：李榆梅 化学工业出版社 药品生物检定 主编：周海钧 人民卫生出版社 一、器具 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250℃干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。 若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物的污染。 二、细菌内毒素检查用水（BET水的要求）： 凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。 光度测定用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。 三、供试品溶液的制备 某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的pH在6.0—8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。 四、内毒素限值的确定 细菌内毒素的量值和细菌内毒素的限值（L） 为保证用药安全，给每一种药物规定了相应的限值（L），只要低于该限值，按照规定给药途径即为安全。1EU与1个内毒素国际单位(IU)相当。 药品、生物制品的细菌内毒素限值(L) 一般按下式确定： L= K/M 式中，L为供试品的细菌内毒素限值； K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量； M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量。 哺乳动物对细菌内毒素有一定的耐受能力，因此不必要求药物绝对不含内毒素，只要不超过一定限度就不会引起热原反应。为保证用药安全，给每一种药物规定了相应的限值(L)，只要低于该限值，按照规定给药途径即为安全。内毒素检查的目的就是确定药品内毒素值是否低于限值。限值的确定有两种方式，即从药典中查询和根据公式计算。各国药典规定做细菌内毒素检查项的品种都可在药典正文中查到相应的限值。 五、最大有效稀释倍数的确定（MVD） 最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数（1一MVD），在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。用下式来确定MVD： M VD= cL/ λ 式中：L为供试品的细菌内毒素限值； c为供试品溶液的浓度； λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度，或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。 【例】最小有效稀释浓度(MVC)的计算 设鲎试剂的灵敏度为0. 25EU/ml，即λ=0.25EU/ml，枸橼酸的内毒素限值L为 0.51U/mg（IU与EU等同），计算其最小有效稀释浓度(MVC)。 解：由于枸橼酸为固体，则MVD取1，可以通过c=λ/L确定最小有效稀释浓度，即MVC=0.25/0.5=0.5mg/ml.