表没食子儿茶素没食子酸酯对猪精液常温保存效果的研究.pdfVIP

摘要 摘要 人工授精技术是生猪养殖中的关键环节，需要高质量的常温保存精液，而常温保 存稀释液对精液品质具有很大影响，影响精液品质的诸多因素之一就是过量活性氧 （Reactive oxygen species ，ROS ）的产生。过量的ROS 产生会导致精子氧化应激，造 成细胞器及质膜损伤甚至损害精子DNA ，影响精子的受精能力以及人工授精后母猪的 繁殖性能。目前的研究表明，在稀释液中加入适当的抗氧化剂可以有效防止精子的氧 化损伤，从而提高常温保存的精液品质。因此，本试验通过在猪精液常温保存稀释液 中添加天然抗氧化剂——表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate ，EGCG ）， 并通过对17 ℃常温保存的第1～5 d 的猪精子活率、质膜完整率、顶体完整率，总抗氧 化能力（T-AOC ）、丙二醛（MDA ）含量、活性氧（ROS ）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、 过氧化氢酶（CAT ）以及ATP 含量、线粒体膜电位 （MMP ）和琥珀酸脱氢酶（SDH） 活性等指标进行测定，研究EGCG 的抗氧化性能，分析稀释液中添加EGCG 对常温保 存猪精液品质的影响，以期对EGCG 作为猪精液常温保存抗氧化剂的应用提供理论依 据。本试验主要获得以下研究结果： 1. 猪精液常温保存稀释液中添加不同浓度的（10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L、 40 μmol/L 和50 μmol/L ）EGCG ，对猪精液常温保存均有积极的保护作用。当稀释液中 添加20 μmol/L 和30 μmol/L EGCG 时可以达到最佳效果，且两组之间无显著差异（P 0.05 ），添加20 μmol/L EGCG 组精液17 ℃保存第5 d 的精子活率、质膜完整率及顶体 完整率分别达到78.36%、74.17%和63.09%，显著高于对照组和其余处理组（P 0.05 ）； 但是，稀释液中添加50 μmol/L EGCG 组精子活率与对照组相比无显著差异（P 0.05 ）。 稀释液中添加10 μmol/L 与40 μmol/L EGCG 组相比，精子活率无显著差异（P 0.05 ）。 2. 在猪精液常温保存稀释液中添加不同浓度的 EGCG 均能够提高精子 T-AOC 、 SOD、CAT 活性，降低MDA 含量和ROS 水平，且与对照组相比差异显著（P 0.05 ）。 稀释液中添加20 μmol/L EGCG 处理组精子T-AOC 、SOD、CAT 活性显著高于其他组 （P 0.05 ），MDA 含量和ROS 水平显著低于其他组（P 0.05 ）。50 μmol/L EGCG 处理组的ROS 水平和CAT 活性与对照组相比无显著差异（P 0.05 ），但能够显著提 高T-AOC 和SOD 活性，降低MDA 含量（P 0.05 ）。在30、40 和50 μmol/L EGCG 处理组间，精子T-AOC 活性、MDA 含量和SOD 活性相比差异不显著（P 0.05 ）。 另外，在稀释液中添加EGCG 常温保存1 d 后，其保存效果与对照组相比差异显著（P 0.05 ），但保存第3 d 与第5 d 之间的效果差异不显著（P 0.05 ）。因此，EGCG 在 猪精液常温保存稀释液中的最佳浓度为20 μmol/L，其有效保存时间可达到5 d 。 3. 在猪精液常温保存稀释液中添加EGCG 能够不同程度的增强精子的线粒体功能 I 西北农林科技大学硕士学位论文 和能量代谢。但是，随着EGCG 添加量的增加精液保存效果反而下降。稀释液中添加 20 μmol/L EGCG 保存效果最好，常温保存第5 d 时精子的ATP 含量、线粒体膜电位、 SDH 活性分别达到4.4 μmol/mL、3.1 ΔΨm 和69.2 U/mL，均显著高于对照组（P 0.05 ）。 与20 μmol/L EGCG 处理组相比，EGCG 浓度为30 μmol/L 时精子线粒体膜电位及保存 1 d、5 d 的SDH 活性均无显著差异 （P 0.05 ），ATP 含量和保存3 d 的SDH 活性均 显著低于20 μmol/L EGCG 组（P 0.05 ），但均优于对照组（P 0.05 ）。当E