AM-AM-FS-Ac-19042 蜂蜜中糖的分离.docVIP

PAGE PAGE 1 AMAMFSAc19042 蜂蜜 糖 分离 木炭柱色谱法 AM-AM-FS-Ac-19042 蜂蜜中糖的分离 1.原理概要 当所关心的糖主要是蔗糖时，则可按蜂蜜中糖的分离B和C用木炭柱分离糖，用葡萄糖氧化酶方法，测定经转化酶水解前后的二糖流分2中的葡萄糖，再换算成蔗糖。其它的糖可通过称量各分离组分的固体残留物的重量来确定。 2.试剂 (a)柱子——按19-41B制备。也可把木炭制成浆再制备:用玻璃棉塞塞住柱子的下口，加大约1cm干助滤剂。从柱的下端湿润助滤剂，在柱的下口打开时将20g吸附剂混合物与2OOml水配成的浆从柱上端加入，让水流5min，然后加26.7kPa压力，直到柱填料表面稳定为止。再加69kPa压力，移去加压，从上端吸去高出17cm的柱填料口大约1cm的助滤剂。按19-41B洗柱子。 (b)乙酸缓冲溶液——0.1Mol/L,pH4.5。将5.72ml HOAC加到500ml水中，用1M NaOH将pH调至4.5，稀释到1L。 (c)Tris缓冲溶液——pH7.6。称量48.44g三烃甲基甲胺，加5OOml水和384ml 0.8Mol/L HCI，必要时将pH调到7.6，然后再稀释至1L。 (d)葡萄糖氧化酶——过氧化物酶试剂(GOP)——将120mg葡萄糖氧化酶和32mg过氧化物酶到400ml t