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细胞生物学实验操作规范 目录 TOC \o 1-5 \h \z \o Current Document 一、 显微操作技术： 3 \o Current Document 二、 细胞培养技术： 3 \o Current Document 第一章 细胞培养基础 3 \o Current Document 细胞培养基本概念： 3 \o Current Document 细胞培养的环境 3 \o Current Document 细胞培养设施和基木条件 4 \o Current Document 无菌操作技术耍领 5 \o Current Document 培养用品的清洗与消毒 6 \o Current Document 第二章 细胞培养液 11 \o Current Document 第一节 水与平衡盐溶液 12 \o Current Document 第二节细胞培养基的基本要求 12 \o Current Document 第三节天然细胞培养基 13 \o Current Document 第四节干粉培养基的配制 18 \o Current Document 第五节 无血清技术及其培养基 18 \o Current Document 第六节 其他细胞培养用液 21 \o Current Document 第三章细胞培养的基本方法 23 \o Current Document 第一节 培养细胞的细胞生物学 23 \o Current Document 第二节细胞分离技术 30 \o Current Document 第三节 细胞的冻存与复苏 32 \o Current Document 第四节细胞计数及活力测定 35 \o Current Document 第五节培养物的污染及防止 36 \o Current Document 三、 制片技术： 40 \o Current Document 载玻片和盖玻片的使用 40 \o Current Document 切片技术（徒手切片）： 41 \o Current Document 压片技术： 42 \o Current Document 涂片技术： 42 \o Current Document 滴片技术： 43 \o Current Document 装片技术 44 \o Current Document 四、 染色技术 44 \o Current Document 一、 线粒体和液泡系的超活染色与观察 44 二、 DNA-Feulgen 染色 46 \o Current Document 三、 台盼蓝染色 47 四、 DAPI染色 47 \o Current Document 五、 参考文献 47 一、 显微操作技术: 二、 细胞培养技术: 第一章细胞培养基础 1 ?细胞培养基本概念: 细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内环境，在无菌、适当温度及酸碱 度和一定营养条件下，使其牛长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细 胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。 在医学遗传学研究屮应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤成纤维细胞和各 种能在体外长期牛长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可 重复取材等优点，它在临床染色体分析屮使用最广泛。体外培养细胞株可在培养 过程屮发牛自发的或在外界作用下的转化，成为永久细胞系，也可直接建成永久 细胞系，永久细胞系能在体外无限制制的传代和牛长。永久细胞系通常具有菲整 倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特征。但细胞克隆的细胞系其这i特征可 以不明显。 2 ?细胞培养的环境 细胞在体外培养屮所需的条件与体内细胞基本相同。 1、 无污染环境 培养环境无毒和无菌是保证细胞牛存的首要条件。当细胞放置于体外培养 吋，与休内和比细胞丢失了对微牛物和有毒物的防御能力，一旦被污染或口身代 谢物质积累等，可导致细胞死广。因此在进行培养屮，保持细胞牛存环境尢污染、 代谢物及时清除等，是维持细胞牛存的基本条件。 2、 恒定的温度 维持培养细胞旺盛牛长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的标准温度 为36.5°C±0.5°C,偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。 培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39°C吋，细胞代谢与温 度成正比；人体细胞在39-40°C 1小吋，即能受到一定损伤，但仍有可能恢复； 在40-41°C1小吋，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有可能恢复；41-42°C 1小吋, 细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，个别细胞仍有恢复可能；当温度在43°C 以上1小时，细胞全部死亡。 3＞气体环境 气体