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实验二?培养基的配制及灭菌 实验二培养基的配制及灭菌 一、 实验目的: 掌握常用培养基的制备方法； 了解培养基的成分、类型及特点； 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。 二、 实验原理 人工配制的培养基是植物组?织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适 当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机 Jb JTTL 有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及具他成分。培养基的主要成分的详细内容见课 本 P26?29。为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一?定倍数的母液， 用时 稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。 基本培养基有8中母液,即人量元素母液、微量元索母液、有机物母液、钙盐母液、铁 盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一 是可 以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基木培养基时使 用；二 是配成几种不同的混合液，这样在人暈配制同一种培养基时更省时、省力。在配制母液 时应 注意防止沉淀产生。绝人多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解， 必要 时加入稀酸或稀碱等物质促溶。各类植物生长调节物质的用量极小，它们对外植体愈伤 组织 的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作川。通常使用的浓度单位是mg/Lo 配制好的培养基应在24h之内完成灭菌丁作，以免造成杂菌人量繁殖。灭菌方法有：高 温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一 般是 在0. lOSMPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少 时间 见课本P32表2一2。培养基必需保证绝对无菌，占则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生 而 导致植物死亡。灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。 （一）、组成培养基的五类成分 日前，人多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生索、生长调节物质和有机附加 物等五类物质组成的。 无机营养物 无机营养物主要由人量元素和微量元索两部分组成，人量元索屮，氮源通常有硝态氮或 镀态氮，但在培养1 实验二培养基的配制及灭菌 一、 实验目的: 掌握常用培养基的制备方法； 了解培养基的成分、类型及特点； 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。 二、 实验原理 人工配制的培养基是植物组?织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适 当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机 Jb JTTL 有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及具他成分。培养基的主要成分的详细内容见课 本 p26、29。为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一?定倍数的母液， 用时 稀释，储存于冰箱低温（2、4摄氏度）屮待用。 基木培养基有8小母液，即人童元素母液、微量元索母液、有机物母液、钙盐母液、铁 盐母液、肌醉母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一 是可 以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使 用；二 是配成几种不同的混合液，这样在人量配制同一种培养基时更省时、省力。在配制母液 吋应 注意防止沉淀产生。绝人多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解， 必要 时加入稀酸或稀碱等物质促溶。各类植物生长调节物质的用量极小，它们对外植体愈伤 组织 的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。通常使用的浓度单位是mg/Lo 配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌人量繁殖。火菌方法有：高 温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一 般是 在0. 105MPa压力下，温度121摄氏度吋，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少 时间 见课木P32表2一2。培养基必需保证绝对无菌，否则因具营养丰富细菌、真菌极易滋生 而 导致植物死亡。火菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。 （一）、组成培养基的五类成分 曰前，人多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生索、生长调节物质和有机附加 物等五类物质组成的。 1?无机营养物 无机营养物主要由人量元索和微量元索两部分组成，人量元素屮，氮源通常有硝态氮或 讓态氮，但在培养1 明显成功。这种培养基小的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养 上和生理上的需要。因此，i般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋门水解物、酵母提取物 及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基木成分相比，MS培养基屮的硝酸盐、钾和钱 的含量高，这是它的明显特点。 B5培养基