植物HP1蛋白的H3K9me2多价态识别参与异染色质形成.pdfVIP

摘 要 摘 要 真核生物基因组被有序地组织压缩形成染色质，染色质可以分为两种：常染色 质和异染色质。异染色质被高度凝缩，这种致密的结构对维持染色体完整性和稳定 性，以及转座子沉默至关重要。异染色质功能失调会引起异常重复修复、染色体分 离错误、转座子激活等而引发遗传混乱，与衰老和肿瘤发生密切相关。异染色质蛋 白HP1 结合保守的异染色质标记组蛋白H3K9 甲基化，构成异染色质凝缩状态的 结构基础，在染色质结合和自由的状态中活跃转换，对维持异染色质功能不可或 缺。但是在植物中，异染色质阅读器蛋白至今未被报道。从酵母到哺乳动物，HP1 在进化上是相当保守的。然而，HP1 在植物中的功能并不保守，它的同源蛋白LHP1 在拟南芥中是 H3K27me3 的阅读器。因此，发掘植物中真正的异染色质阅读器蛋 白，研究它的异染色质调控机制是十分必要的。 在本论文中，我们在植物中发现了一类新型的H3K9me2 阅读器蛋白ADCP1 ， 也是植物中的HP1 功能蛋白，能够多价态识别H3K9me2 并介导异染色质形成。前 期我们的合作者从SPRi 平台筛选到了H3K9me2 多肽结合蛋白Agenet 结构域包含 蛋白ADCP1 和ADCP2 ，并且发现ADCP1 在体外能与H3K9me3 修饰的核小体串 发生相分离。随后我们对ADCPs 的体内阅读器功能进行了深入的探究。首先，运 用免疫荧光染色和ChIP-seq，分别在细胞和分子水平上确定了ADCP1 的基因组定 位，发现ADCP1 与H3K9me2 高度共定位。其次，通过基因敲除和超表达实验发 现ADCP1 对细胞核异染色质染色中心的形成至关重要。随后，对adcp1 突变体的 H3K9me2 和DNA 甲基化水平进行检测，发现ADCP1 参与异染色质H3K9me2 和 CHG/CHH 甲基化的维持；同时，我们分析了adcp1 突变体的转录组，发现ADCP1 也在转座子沉默中发挥功能。最后，研究发现ADCP1 与HMGA 互作以及ADCP1 被染色质结构因子所调控，为ADCP1 作用机制的探讨提供了一些线索。此外，我 们对ADCP2 的功能也做了一些分析，发现它可能是一个组织特异性的异染色质调 控蛋白。 综上所述，本研究报道了植物中一类新型的异染色质阅读器蛋白ADCP1 ，揭 示其在异染色质形成中的重要作用，体现了不同生命界表观调控的复杂性和保守 性，同时也为其他植物，尤其是转座子比例更高的水稻、玉米等粮食作物提供新的 研究思路。 关键词： 异染色质；HP1 ；H3K9me2 ；阅读器；ADCP1 I 目 录 目 录 第1 章 前言 1 1.1 异染色质的研究 1 1.1.1 异染色质的功能 1 1.1.2 组成型异染色质的形成 2 1.1.3 植物异染色质研究现状 4 1.2 异染色质蛋白HP1 的研究现状 7 1.2.1 HP1 蛋白家族的结构和功能 7 1.2.2 HP1 蛋白的相分离11 1.2.3 拟南芥HP1 同源蛋白LHP1 12 1.3 研究目的和意义 13 1.4 拟南芥H3K9me2 阅读器的研究 14 1.4.1 Agenet 结构域的研究 14 1.4.2 ADCP 蛋白体外结合H3K9me2 15 1.4.3 ADCP1 与H3K9me3 核小体串相分离 18 第2 章 实验材料与方法 21 2.1 实验材料 21 2.1.1 植物材料 21 2.1.2 分子生化实验试剂 21 2.2 实验仪器 22 2.3 实验方法 23 2.3.1 质粒构建 23 2.3.2 植物培养 25 2.3.3 转基因植物筛选 25 2.3.4 拟南芥