临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立 李金明[借鉴].docxVIP

文档收拾 | 学习参阅 collection of questions and answers 临床PCR试验室的设计及质量办理系统的树立 卫生部临床查验中心 李金明 核酸（DNA和RNA）是生命现象的根底。小到病毒、细菌等微生物，大到动植物和人类，都无一例外。因为主导生命活动的受体、细胞因子、酶、激素等均不过是核酸发挥功用效果的表型，均由核酸决议，在核苷酸序列上哪怕是单个碱基的变异，都会引起表型的彻底改动，并然后影响生命功用的发挥，导致疾病的产生。因而，在核酸或称为基因水平上检测，对临床疾病实质的提醒就要更深一步。也正因为核酸是生物体生命活动之源，关于感染性病原体的检测，从核酸着手，最能反映病原体在机体内的呈现和消长。 自从美国Cetus公司Mullis博士在1983年创造聚合酶链反响（PCR）这种核酸扩增技能以来，因为其极高的检测灵敏度和特异性，因而在临床感染性疾病、遗传病、肿瘤等的确诊和效果调查上得到了广泛的运用，在器官移植的基因配型上也是难以代替的技能。其运用大大进步了上述疾病确诊的精确性和快速性。但临床PCR查验有必要按规范要求进行，并有严厉的试验室质量办理，不然，因其极高的检测灵敏度，试验室稍有曾经扩增产品的污染，或在标本核酸提取进程中标本间的穿插污染，均可导致假阳性成果的呈现。一同，也会因为试剂和试验消耗品的质量不过关、仪器设备的保护校准不到位，或操作的不规范等，也很简略呈现假阴性成果。 榜首节 临床PCR试验室的分区规划设计 怎样规划规划一个合格的试验室是每一个临床PCR试验室首要要遇到的问题，因为一个试验室一旦经过规划并完结装饰，如不契合要求，则会呈现很大的费事，甚至不得不拆了重来。那么怎样才干规划一个合格的试验室呢？简略地说，便是十六个字，“各区独立、留意风向、量体裁衣、便利作业”。一同要留意临床标本的接纳问题。 关于临床PCR试验室的分区及其设备装备，卫生部公布的《临床基因扩增查验试验室办理暂行办法》（卫医发[2002]10号）中作了明晰规矩，而且卫生临床查验中心宣布的配套文件《临床基因扩增查验试验室作业规范》（卫检字[2002]8号）又对各区的功用及留意事项作了论述。但详细到某一个试验室，怎样根据其实践状况和环境规划一个契合要求、可确保检测质量及便利作业的PCR试验室，试验室技能人员仍常常感到心里没底，因而，本章拟对临床PCR试验室分区规划规划和作业流程的一般准则再作一些详细的论述，并尽或许举出一些实例加以阐明。 一、临床标本的接纳 关于比方血清（浆）、分泌物、痰液、尿液、脑脊液等临床标本的接纳、别离血清、编号甚至保存，一个临床PCR试验室终究应在何处进行较为适宜？这是一个十分实践的问题，也是作为一个临床试验室首要要处理的问题，常常有同路提出来。 要答复这个问题，首要让咱们来看一下临床标本送到试验室今后咱们所要做的是什么？一般来说，当临床标本如血液、分泌物和其他体液等送到试验室后，依照临床基因扩增查验质量确保对标本搜集、运送和保存的要求，对标本接纳编号后，即应赶快对其别离血清（浆）或预处理后保存待测，而且根据对临床标本较长时刻保存的要求，最好是在别离血清（浆）时，分出两管来，一管用于测定，一管长时刻保存备检。因而，最好是在PCR试验室的四个独立测定区域之外的当地接纳临床标本，有一台别离血清（浆）用离心机、一台生物安全柜、一台冰箱、加样器及相应一次性经高压处理的消耗品如带滤芯吸头、标本接纳编号记载本以及记号笔等即可。假如不在标本接纳差异离血清（浆）标本，仅仅简略的接纳，则就不需求别离血清（浆）用离心机、生物安全柜、加样器及其消耗品。 一般，有许多试验室将临床标本的接纳处放在标本制备区，而一个医院临床标本的运送至试验室往往不会在同一个时刻，标本来了就应该进行接纳挂号、交代签字和对标本进行编号，并赶快别离血清（浆）或相应处理，因而，如将标本接纳处放在标本制备区，就会因为临床标本的接纳而使试验室作业人员频频收支标本制备区，然后添加试验室污染的时机。而且因为条件所限，有恰当一部分临床基因扩增查验试验室的设置为一个区套一个区的办法，要进入标本制备区就有必要先进入试剂预备区，最终还只能经扩增区从产品剖析区出试验室。这种状况下就有必要将临床标本的接纳处放在四个区之外的当地，可以与其它临床标本的接纳、编号和保存处放在一同。如在标本接纳处对血液标本进行血清（浆）别离，则要留意防污染，所用用具契合要求并在生物安全柜中进行。 所接纳的用于PCR查验的标本应搜集在原始密闭的一次性无菌容器中，不能接纳从其它检测如生化、免疫查验等分出来的标本，因其有较大的产生标本间污染的或许性。接纳临床标本时，操作者应穿作业服及带手套，每份标本应放在恰当的架子中，防止走漏，并给出一个仅有性编号。标本的保存按要求进行，冰冻一般在－20℃～－