转基因动物与生物反应器教学PPT课件.ppt

胚胎干细胞法建立转基因鼠的实验程序 与传统育种方法相比较，ES细胞在生产转基因动物方面表现其独特的优势： （1）打破了物种的界限，突破了亲缘关系的限制，加快了动物群体遗传变异程度； （2）可以进行定向变异和育种，利用同源重组技术对ES细胞进行遗传操作，通过细胞核移植生产遗传修饰性动物，有可能创造新的物种； （3）利用ES细胞技术，可在细胞水平对胚胎进行早期选择，这样可以提高选择的准确性，缩短育种时间。近年来的研究表明，利用ES细胞生产转基因动物在动物生产中发挥着极为重要的作用。 4 精子载体法 直接用精子作为外源DNA载体的转移方法。 主要问题：重复性不好 精子与外源DNA结合的机理 精子直接与外源DNA混合培养，外源基因可以直接进入精子头部，受精后就可发育成转基因动物。 后来Rottman对此方法进行了改进，将外源DNA在与精子共孵育之前用脂质体包埋，使脂质体与DNA相互作用形成脂质体——DNA复合物。这种复合体比较容易和精子细胞融合，从而进入细胞内。 5 YAC介导的基因转移 酵母人工染色体（YAC）载体是近年来发展的新型载体，具有克隆百万碱基对的大片段外源DNA能力。 流程：ES转染YAC后体外筛选→阳性ES细胞囊胚腔注射，或YAC原核微注射 突出的优点：保证大片段基因的完整性 6 细胞核移植技术 将体细胞移植技术(克隆动物)与转基因技术结合，使转基因的群体能迅速被克隆扩大，还能保证目的基因在克隆后代中的稳定表达。 优点：后代100%全是转基因个体，可以选择后代性别，转基因后代遗传背景和稳定性一致，不需选配，节省时间和费用。 缺点：难度大，成功率低、胎儿成活率不高 第二节：转基因动物的应用 （1）动物品种改良； （2）生物制药(乳腺生物反应器)； （3）建立人类疾病的动物模型； （4）生产可移植用的动物器官； （5）基因治疗(动物模型)； （6）基因打靶。 （1）动物品种改良 抗病育种 生长性状 （2）生物制药(乳腺生物反应器) 如荷兰的GenPharm公司用转基因牛生产乳铁蛋白，预计每年从牛奶生产出来营养奶粉的销售额是50亿美元。 （3）建立人类疾病的动物模型 已建立的部分人类疾病的转基因动物模型 _____________________________________________ 疾病模型 基因转移方法 转导的基因 ______________________________________________________ 老年性痴呆征 显微注射 β淀粉样蛋白基因 Ⅱ型糖尿病 显微注射 胰岛淀粉样多肽基因 β地中海贫血症 显微注射 人β珠蛋白基因 镰刀形细胞贫血症 显微注射 人α和β珠蛋白基因 唐氏综合症 显微注射 Cu/Zn-SOD酶基因 卡氏肉瘤 反转录病毒转染 HIV tat基因 成骨不全症 显微注射 突变的α1胶原蛋白前体基因 自毁容貌症 ES细胞同源重组 突变HGPRT基因 _____________________________________________ 4）生产可移植用的动物器官 我国每年有150万人需要器官移植，但是仅仅不到1万人能够得到供体。 猪的脏器移植给人，会发生超急性排斥反应。 转基因技术生产能降低排斥反应的转基因猪。 Science (2002). 295, 1089–1092 （5）基因治疗 上世纪九十年代初，一位因ADA(腺苷酸脱氨酶)基因缺陷导致严重免疫缺损的四岁女孩，由美国国立卫生研究院用ADA基因治愈。“基因治疗”研究热从此波及全世界，起而效颦，为保障人类健康展现了美好的前景。 （6）基因打靶 基因打靶(Gene targeting)是一种在胚胎干细胞(ES)技术和同源重组技术的基础之上,定向改变生物活体遗传信息的实验手段。 基因整合三种方式： 基因随机插入 基因敲除 基因替换 基因打靶 基因打靶的研究意义 基因功能研究 人类疾病动物模型的研制 经济动物遗传物质的改良 胚胎干细胞介导的基因打靶技术 首先获得ES细胞系，利用同源重组技术获得带有研究者预先设计突变的中靶ES细胞。通过显微注射将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞仍然保持分化的全能性