基因甲基化检测.docxVIP

甲基化是在 DNA甲基转移酶（ DNA Methyltransferase, DNMT ）催化作用下 , 利用 S- 腺苷甲 硫氨酸 (S-adenosylmethionine, SAM) 提供甲基，在 CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶环的五号碳 原子上加上甲基的共价修饰过程 . DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式，它不改变 DNA的一级结构，却在细胞的发育、基因 的表达、及基因组的稳定性中起着重要的作用。 CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普遍现象， 而启动子 CpG 岛的高甲基化是除突变和缺失外 肿瘤中抑癌基因失活的第三种机制。 因此，基因启动子甲基化检测在临床诊断（如甲基化检测与低剂量 CT相结合）、药物敏感 性检测等方面具有很高的应用价值。 目前甲基化特异性 PCR(Methylmion Specific PCR ， MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的 经典方法．  MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组  DNA，所有未发生甲基化的胞 嘧啶都被转化为尿嘧啶，  而甲基化的胞嘧啶则不变。  然后设计针对甲基化和非甲基化序列的 引物并进行聚合酶链反应  (PCR)扩增，最后通过琼脂糖凝胶电泳分析，  确定与引物互补的  DNA 序列的甲基化状态。  MSP法灵敏度较高，应用范围广。 一. MSP  实验流程： 1. 基因组抽提； 2. 基因组 DN