第八章几种显微技术的应用.pptVIP

第八章 几种显微技术的应用 明视场研究用显微镜的操作技术 镜检顺序 1.打开主电源开关 ，在打开之前，应先将右侧电压升降拉杆放在最低处，再打开主机开关，并逐步升高电压。 底座上发光二极管可显示当前电压值。;2.把标本固定在载物台上 3.用10X物镜对焦，将10X物镜引入光路，先粗调，再微调达到最清晰。 4.双目镜筒间距和视度差的调节 5.根据要求放大倍数，旋转物镜转换器，使所选物镜进入光程，再进行微调，使标本清晰。光亮不足，可增大电压或取掉ND滤光片。 ;聚光镜的调节 聚光镜位置调节 ①缩小视场光阑，视场中出现一个正多边形，若边缘不清楚，表明聚光镜的位置不合适。 ②慢慢向上或向下调整聚光镜，使多边形边缘逐渐达最清楚；这样聚光镜就处于正确位置。;聚光镜中心位置调节 ①将视场光阑缩至较小状态。 ②旋转两个聚光镜中心调节螺丝，把正多边形的视场光阑像移到目镜中心。 ③慢慢开启视场光阑，直至目镜视场与正多边形的视场光阑像外切。 ;中心调节螺丝;视场光阑的调节 调节照明范围，按物镜情况缩小视场光阑，遮断多余的光线，从而获得分辨率和反差好的像，且增大焦深。标本反差低时，在摄影时以视场光阑像占目镜视场以70～80％为宜。 ;孔径光阑的调节 通过物镜的数值孔径与照明系的数值孔径相对应，可得到分辨力和反差好的像，并可增大焦深。显微标本一般反差较低，调节时可使孔径光阑像占物镜光瞳的70—80％较合适。;浸油物镜的使用 ①先用低倍物镜对焦。 ②在标本上滴上浸渍油。 ③旋转转换器，把浸油物镜引入光程，用微调旋钮对焦。 浸油聚光镜的使用 先把标本从镜台上取出，把油滴在聚光镜的前透镜上，再把标本放到载物台上，慢慢升高聚光镜，直到与载玻片接合为宜。 使用完后用无水乙醇与乙醚(3：7)混合液擦去浸油。 ;观察中滤色片的使用 (1)防止耀眼和减轻眼睛疲劳。 防止耀眼：采用乳白色玻璃或毛玻璃滤光，也可用滤光镜。 减轻眼睛疲劳：根据标本颜色选用绿色、黄色或兰色滤光片，把刺激眼睛的红光吸收掉，以减轻眼睛疲劳。 (2)增进分辨力。将白光中波长较长的光波吸收掉，利用短波光照射，如绿色或兰绿。;各类滤色镜;（3）增大反差：选用与标本颜色互补的滤光片。 ;荧光显微镜的原理及操作技术 荧光的产生 被检物体接受一定波长的激发光，吸收能量变成高能态，立即放出能量，发出长波光，发出的长波光称为荧光。 一次荧光(固有荧光或自发荧光) 一些物体经过短波(紫外线)照射后，本身就能产生荧光. 第二次荧光 很多被检物必须事先用荧光物质进行处理，再经紫外线等短波光照射，才能产生荧光。;落射式荧光显微镜;落射式荧光显微镜原理 ; 分色镜的作用 分色镜放在镜筒中间与入射光线成45o，使入射光线反射并发生方向变化，照向被检物体，它具有使短波光反射，长波光透过的作用。 激发滤色镜作用 装在激发光的光路中，阻止长波光的透过而使短波光通过。 吸收滤色镜的作用安装在观察长波光光路中，吸收短波光，让长波光透过。 ;荧光显微镜的特点 光源 光源是短波光，一般采用100W或200W的超高压汞灯。 激发出的光谱是紫外、紫兰及部分强可见光，所以所有的标本均可用高压汞灯进行激发，通过激发滤光片，得到不同的激发效果。 ;使用超高压汞灯注意事项： ①由于超高压汞灯激发产生紫外线等短波，伴随会产生大量的热量，所以应具有隔热设备，但并不阻碍紫外线的通过。 ②工作环境不能太热，否则影响灯泡的使用寿命及其它附件的工作性能。; ③紫外线对人体有损害作用，必须具有遮光板(棕红色)，并且不能用眼睛在旁边观看，更不能在灯泡未装入灯室而在外边进行启动，这样易爆炸。 ④ 200W超高压汞灯，在每次开启超过两个小时的情况下，平均寿命400小时，100W在相同条件下，平均使用寿命200小时。若刚启动20分钟到1小时之内关电源，会使使用寿命减半，坚决不能在15分钟之内切断电源。 ;滤色镜类 激发滤光片 ①紫外光激发滤光片 可使400nm以下的紫外光透过，而阻挡400nm以上的光。 ②紫兰光激发滤光片 可使350～490nm范围的光透过，而阻挡其它范围波长的光。 ③紫外紫光激发滤光片 可使300 ～ 450nm范围波长光通过。;吸收滤光镜 根据激发镜的不同而确定。原则以完全吸收阻碍激发光(短波光)为宗旨，分为三类： ①紫外光吸收滤光片 ②紫兰光吸收滤光片 ③紫外紫光吸收滤光片;物镜 由氟石磨制的半复消色差物镜，物镜上标有FL标记，40×物镜一般就需要加油观察，油必须是无荧光油。 落射式荧光显微镜物镜内设置聚光镜，在高倍时带有虹彩光阑