【国自然】体内间充质干细胞自我更新、分化及其调控相关组织干细胞的机制研究.docxVIP

项目名称： 体内间充质干细胞自我更新、分解及其调控相关安排干细胞的机制研讨 首席科学家： 李保界 上海交通大学 起止年限： 2012.1至2016.8 依托部分： 上海市科委 一、要害科学问题及研讨内容 拟处理的要害科学问题 依据MSC广谱的疾病医治运用远景，针对现在对MSC的微环境、自我更新、分解机理等缺少系统研讨的现状, 本课题拟处理以下要害科学问题: 经过树立脂肪细胞、成骨细胞、骨髓HSC 缺少及血管再生受阻的动物模型，讨论这几种细胞是否作为骨髓MSC 的微环境调理MSC 的干性保持、自我更新与分解，寻觅这些细胞旁排泄的活性分子在其间的效果，并讨论这些活性分子在反抗安排变老、促进安排再生与损害修正中的效果。 2. 经过在体研讨PTHrP-Bmi1、BMP-MAPK、p16 和p53 通路等在调控MSC 自我更新与分解中的效果机制，阐释MSC 自我更新与分解的要害信号分子在反抗安排变老，促进安排再生及损害修正中的效果，并与微环境中的信号分子树立联络。 3. 经过系统地剖析MSC 自我更新、分解进程中表观遗传学的改动，寻觅受DNA甲基化、组蛋白润饰、non-coding RNA 调控的方针基因。结合基因表达图谱，阐释在 MSC 的保持、自我更新及分解中的新表观遗传学根底。运用基因敲除小鼠，研讨若干要害表观遗传调控基因在 MSC 自我更新与分解中的效果及机制，并研讨其与信号通路的联络。 4. 经过对骨折愈合、HSC 造血和神经损害修正的在体研讨，阐释 MSC 及其分解细胞在这些进程中的效果和机制，以期为 MSC 的临床运用供给理论依据和辅导。讨论两种活性分子经过促进 MSC 增殖及向成骨细胞分解，加快骨构成和骨折愈合以及促进HSC 造血和神经再生与修正的运用远景。 首要研讨内容 1． 树立可辨认和别离体内骨髓MSC的基因工程小鼠系统 拟树立Gt(ROSA)26Sor-YFP；Nestin-Cre小鼠、Gt(ROSA)26Sor-YFP；PrxI-Cre小鼠、Gt(ROSA)26Sor-YFP；Dermo-Cre小鼠，用于调查体内MSC的状况以及经过流式分选这些细胞。 2． 树立可特异性杀死MSC、成骨细胞或许其他细胞的基因工程小鼠系统 运用细胞特异性的CreER(T)和iDTR小鼠，打针白喉毒素特异性杀死Cre表达的细胞。 3． MSC的骨髓微环境中的细胞成分和活性分子判定 特异性地的杀死脂肪细胞/成骨细胞，运用生物活性分子促进HSC从骨髓迁徙到外周血或许按捺血管再生，调查其对MSC增殖和分解的影响；树立并运用细胞共培育系统讨论脂肪细胞、成骨细胞、血管内皮细胞及HSC对MSC的自我更新和分解的影响。运用液体芯片技能剖析脂肪细胞、血管内皮细胞、HSC以及成骨细胞所排泄的生长因子及活性分子，并研讨它们对体内MSC的调控效果。 4． MSC在安排再生与损害修正中的效果 特异性杀死MSC或成骨细胞，比较MSC和成骨细胞作为造血微环境在改进HSC造血中的效果，并讨论BMPRIA和TGF受体特异敲除对HSC造血的影响；研讨MSC的削减或缺失对SSRIs （抗抑郁症药物）引起的NSC神经元分解的或许效果；研讨MSC的削减或缺失对LPS引起神经损害修正的影响。 5． MSC自我更新与定向分解的信号调控机制 研讨Bmi1在MSC增殖、分解以及变老中的效果；研讨p53和p16在Bmi1引起的MSC变老及分解中的效果以及与过氧化物的联络；研讨BMP-BMPRIA-MAPK在调理MSC增殖和分解中的效果及分子机理。 6． MSC自我更新与分解的表观遗传学调控 运用基因敲除小鼠，研讨表观遗传要害调控基因在MSC自我更新与分解中的效果及机制；树立在MSC自我更新与分解进程中被表观遗传润饰的靶基因谱以及与上述要害调控基因的联络；搜索MSC自我更新与分解进程中新的lncRNA和microRNA分子，并阐释其调控成骨分解的功用；树立调控MSC自我更新与分解的表观遗传网络，并与其信号调控网络和基因表达图谱树立联络。 7． 挑选可调理体内MSC更新、定向分解以及促进安排损害修正的活性分子 改造BMP蛋白分子以及挑选BMPs的小分子激动剂，在体研讨BMPs激动剂在体内MSC自我更新、分解、骨再生/骨折愈合以及造血和神经损害修正中的效果；讨论BMP是否经过MSC或成骨细胞促进造血。 二、预期方针 总体方针： 运用多种动物模型，经过研讨正常生理状况下、变老、骨折愈合、造血、神经损害修正进程中MSC的活动与功用，在理论方面，阐释MSC的保持、自我更新、分解的调控机制，深化地了解MSC的生物学实质；在运用方面，讨论活性蛋白或小分子化合物经过调理MSC的增殖与分解，在促进骨再生、HSC造血和神经再生修正中的运用，为MSC广泛的临床运用供给坚实的试验依据。终究促进我国在MS