植物细胞悬浮培养-文档资料.ppt

? 要求：松散性好、增殖快、再生能力强。其外观 一般是色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒 状，疏松易碎 悬浮系的建立与培养 callus 1g/10ml medium 150~250ml flask 100~120 rmp culture transfer 1 time/3d centrifuge isolation 80 rpm subculture 成功的悬浮细胞培养体系特征 ? 悬浮培养分散性良好，细胞团较小，一般 在 30 ～ 50 个细胞以下。 ? 均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相 同。悬浮系外观为大小均一的小颗粒，培 养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或 淡黄色。 ? 细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般 2 ～ 3 天便可增加一倍。 悬浮细胞的生长动态 悬浮细胞生长的衡量 ? 根据不同培养时间的细胞数变化，或细胞 质量变化。 ? 生长速率 (p) ：不同时间细胞密度 (x) 的自然 对数与起始密度 (x 0 ) 的自然对数之差与培养 时间 (t) 的比值 p ＝ (lnx-lnx 0 )/t ? 鲜重：真空减压过滤后称重，反应细胞生 长情况 ? 干重：鲜细胞烘干至衡重，反应细胞质量 影响悬浮细胞生长的因素 ? 起始愈伤组织的质量 ? 接种细胞密度：悬浮细胞的起始密度一般 在 0.5~2.5 × 10 5 个细胞 / 毫升。接种初期的细 胞密度过低往往使延迟期加长。 最低有效 密度 ：即能使细胞分裂、增殖的最低接种 量。 ? 培养条件：培养基、方式、温度、继代周 期。 H O H O H 1 3 1 0 8 1 4 1 0 2 0 H H 1 7 H O H O 2 0 H H 1 3 8 1 4 1 7 H R H H O H H O H R 2 0 S 原 人 参 二 醇 R = H 2 0 S 原 人 参 三 醇 R = ? -O H 2 0 R 原 人 参 二 醇 R = H 2 0 R 原 人 参 三 醇 R = ? -O H 甾醇 R 17 H O 3 强心苷类（侧链为不饱和内酯环） （ 3 ）生物碱：吡啶、喹啉、异喹啉等。 （ 4 ）醌类：包括蒽醌、萘醌等。 （ 5 ）蛋白质类：胰岛素、氨基酸、蛋白酶抑 制剂。植物病毒抑制剂、植物抗生素等。 （ 6 ）黄酮类：具有 C6-C3-C6 结构，生物合 成前体是苯丙氨酸和丙二酸单酰辅酶 A 。多 为治理心血管疾病和高血压的药物成分。 O O 蒽醌 O N OH + - O 小檗碱 OCH 3 OCH 3 O H O O 黄酮 植物细胞培养制药进展 ? 第一个专利： 1956 年 Routin 和 Nickell 首次数提出 利用植物细胞培养技术生产天然产物的第一个专利 ? 工业植物生物技术 ： 20 世纪 90 年代明确提出 ? 已经从 200 余种药用植物获得了愈伤组织或细胞悬 浮培养物（傅经国等， 2004 ） – 国际 ? 日本 ：紫草 人参 红豆杉 ? 欧美 ：美国－红豆杉； 德国－紫锥菊 ? 国内：罗士韦 叶和春 郑光植 侯嵩生 丁家宜 利用途径生产次生代谢产物的优点 ? 不受季节、环境、病虫害影响 . ? 不占耕地，适用于贫瘠的地方 ? 代谢产物生产可以在可控条件下进行 , 可以 通过细胞株筛选、特定生物转化途径与代 谢调控提高目标产物含量 . 技术路线 ? 目标植物选择 – →愈伤组织诱导→→液体培养→→培养条 件的优化→→反应器扩大培养 – →愈伤组织诱导→→固体、液体培养→→ 高产细胞系筛选→→生物合成途径的研究 – →器官分化（发状根）→→固体液体培养 条件的优化→→反应器扩大培养→→有效 成分提取、分离 植物细胞培养 是在离体条件下， 将分离的植物细 胞通过继代培养 增殖，获得大量 细胞群体的一种 技术。 是人工种子、原 生质体培养、花 药培养等的支撑 技术。 植物细胞培养的特点 : ? ? ? ? ? ? ⑴大小 ; ⑵细胞团的形式存在 ; ⑶纤维素细胞壁和大液泡 , 易被剪切力损伤 ; ⑷生长缓慢 ⑸培养基成分丰富而复杂 , 易被微生物污染 ; ⑹需光、氧、二氧化碳 培养类型 ? 按培养对象来说，可分为原生质体培养和单 细胞培养； ? 按培养基类型可分为固体培养和液体培养； ? 按培养方式可分为悬浮细胞培养和固定化细 胞培养 。 植物单细胞分离和初步培养 ? 单细胞获得： ? 机