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? 测定病毒感染力的方法 : ? 半数致死量 LD 50 （ 50% lethal dose ） ? 半数鸡胚感染量 EID 50 (egg 50% infective dose) ? 半数细胞培养物感染量 TCID 50 （ tissue culture 50% infective dose) ? 蚀斑形成单位（ plaque forming unit ， PFU ） 一、病毒 TCID 50 的测定 ? 操作步骤 ? 在青霉素瓶中将病毒作连续 10 倍的稀释，从 10 - 1 -10 -10 。 ? 将稀释好的病毒接种到 96 孔微量培养板中，每一 稀释度作 8 孔，每孔接种 100 μ l 。 ? 在 每 孔 加 入 细 胞 悬 液 100 μ l ， 使 细 胞 量 达 到 3 × 10 5 个 /ml 。 ? 设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。 ? 逐日观察并记录结果，一般需要观察 5-7 天。 ? 结果的计算，按 Reed-Muench 两氏法或 Karber 法 ? TCID 50 的计算方法 Calculation of TCID 50 ? Use of Reed Muench method ( if 50 ul of virus dilution is added to each well) ? Reed-Muench 两氏法 病毒液 CPE 孔数 无 CPE 累 计 出现 CPE 孔 稀释度 孔数 CPE 孔数 无 CPE 孔数 所占的 % 10 -1 8 0 27 0 100 （ 27/27 ） 10 -2 8 0 19 0 100 （ 19/19 ） 10 -3 7 1 11 1 91.6 （ 11/12 ） 10 -4 3 5 4 6 40 （ 4/10 ） 10 -5 1 7 1 13 0.7 （ 1/14 ） 10 -6 0 8 0 21 0 （ 0/21 ） 距离比例＝（高于 50% 病变率的百分数 -50% ） / （高 ＝（ 91.6-50 ） / （ 91.6-40 ） ＝ 0.8 于 50% 病变率的百分数 - 低于 50% 病变率的百分数） lgTCID 50 = 距离此例×稀释度对数之间的差 + 高 于 50% 病变率的稀释度的对数 =0.8 × (-1)+(-3) =-3.8 TCID 50 =10 -3.8 ／ 0.1ml ? Karber 法 病毒液稀释度 出现 CPE 孔的比率 10 -1 8/8=1 -2 10 8/8=1 10 -3 7/8=0.875 10 -4 3/8=0.375 10 -5 1/
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