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细胞培养常见问题及其解决 作者:佚名文章來源：丁香园点击数：1056更新时间：2009-9-30 9:44:00弋收藏此帀 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在D.MEM或\1199中同样很 容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPM1-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数拥上之更换时间，按时更换培养基即可。 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均冇其特定使用且已适应Z细胞培养基，若骤然使用和原先提供Z培养条件 不同Z培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为巫要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产 生极大的影响。来IH不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都冇所不同，血清使 用错谋常会造成细胞无法存活。 5 何谓 FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum)和FCS (fetal calf serum)是相同的意思, 两者都是指胎牛血清, FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum)则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6培养细胞时应使用5 %或10% C02?或根本没有影响? -般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHC03的含量将决 定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHC03含量为每公升3?7 g时,细胞培养时应 使用10 % CO2；当培养基中NaHC03为每公升1.5 g时,则应使用5 % CO2培养细胞。 7?Hanks平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要C02培养箱。原因是什么？ Hanks平衡盐 溶液(HBS)和Earles平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？ HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在Eagles (2. 2g/L)中比在Hanks (0. 35g/L)中高。 碳酸氢钠需用高水平的C()2平衡，以维持溶液的P1I值。陥gles液在空气水平的C()2中，溶液会 变碱,Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，。 如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。 细胞之接种密度为何？ 依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造 成细胞无法生长Z—重要原因。 悬浮性细胞应如何继代处理？ 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀稗细胞浓度即可，若培养液太多时，可将 培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培 养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，巫复前述步骤即可。 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后，须立即放入37 ° C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管山液氮桶中取出解冻时,必 须注意安全，预防冷冻管Z爆裂。 11?细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO? 除少数特别注明对DMSO敏感Z细胞外，绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞)，在解冻Z后， 应宜接放入含W 10-15ml新鲜培养基Z培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即 可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 12.附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？ 一般使用Z trvpsin-EDTA浓度为0. 05% trvpsin-0. 53mMEDTA. 4 Na0第一次开瓶后应立即少量 分装于无菌试管中，保存于-20 ° C,避免反复冷冻解冻造成trypsin Z活性降低，并可减 少污染之机会。 13?欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？ 欲冋收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约1, OOOrpm), 5-10分钟，过高之转速，将 造成细胞死亡。 细胞冷冻培养基之成份为何？ 动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMS() (dimethyl sulfoxide)和90 - 95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：山于DMSO稀释时会放出大量热能，故 不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。 DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？ 冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650),其本 身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试