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细胞培养过程中的注意事项及试剂配制 一?常用设备 准备室的设备： 单蒸懾水蒸饰器、双蒸饰水蒸饰器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物殆）、 储品规（放置消毒过的物品）、包装台。 配液室的设备： 扭力天平和电子天平（称蹩药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置 溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80D. 空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集 细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、 4°C冰箱（放igserum和培养用液）。 二?无菌操作 无菌室的灭菌： 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自來水拖地、擦桌子、超净工作台等，然厉用 3%。來苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。 CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3%c新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%过 氧乙酸，再用紫外灯照射 实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20?30分钟 实验后灭菌：用75%酒精（3%g新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒宜显微镜的载物台。 实验人员的无菌准备： 肥皂洗手。 穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋 用75%酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示： 1?凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋片酶的瓶子均要用75%洒粕擦拭 瓶子的外表面 靠近酒精灯火焰操作。 器皿使用前必须过火灭菌 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在髙处，使用吋仍要过火。 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 6 ?吸取两种以上的使用液吋要注意更换吸管，防止交叉污染。 三?器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消： （1） 新的玻璃器皿的洗消： H來水刷洗，除去灰尘。 烘干、泡盐酸：烤箱屮烘干，然厉再浸入5%稀盐酸屮12小时以除去脏物、铅、碑等 物。 刷洗、烘干：12小时厉立即用白来水冲洗，再川洗涤剂刷洗，自来水冲干净片川烤箱 烘干。 泡酸、清洗：用清洁液（重锯酸钾120g：浓硫酸200ml:蒸馅水1000ml）浸泡12小时, 然后从酸缸内捞出器皿用白來水冲洗15次，最后蒸啊水冲洗3?5次和用双蒸水过3次。 烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（汕光纸）包装。 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线 上升时,关闭安全阀,当指针指向15磅时,维持20?30分钟。 高压消毒后烘干 （2） 旧的玻璃器皿的洗消: 刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入來苏尔液或洗涤剂溶液屮，泡过來苏尔 溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 泡酸、清洗：烘T后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器皿立即用H來水 冲洗（避免蛋片质干汹后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸谓水冲洗3次。 烘T、包装：洗T净的器皿烘T后取出用牛皮纸（汕光纸）筹包装，以便于消毒储存 及防止灰尘和再次被污染。 4?高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的 上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3?5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上 升，当指针指向15磅吋，调节电开关维持20?30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽 轻轻盖上） 烘T备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘T?备用。 金属器械洗消： 金属器皿不能泡酸，洗消吋可先用洗涤剂刷洗，后用白來水冲T净，然后用75%酒精擦 拭，再川自来水，然芾用蒸憎水冲洗，再烘干或空气屮晾干。放入铝制盒内包装好在高 压锅内15磅高压（30分钟）消毒，再烘干备用。 橡胶和槊料： 橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷T?净，再分别用白來水和蒸懈水冲T?净, 再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如卜的处理程序： I .针式滤器帽不能泡酸液，用NaOH泡6?12小吋，或者煮沸20分钟,在包装Z前要装好滤 膜两张，安装滤膜时注意光面朝上（凹向上），然后将螺旋稍微拧松-?些，放入铝盒屮在 高压锅内15磅30分钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时■应该立即将螺旋旋 紧。 胶塞烘干后用2%氢氧化钠溶液煮沸30分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30分钟）， 自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸饰水，三蒸水洗净，烘 干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。 胶帽，离心管帽烘干厉只能在2%氢氧化饷溶液屮浸泡6?12小时（切记时间不能过 长），白來水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用白來水，蒸網水，三蒸水洗 净，烘干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。 胶头可用75%酒精浸泡5分钟，然后紫外照射后使用即可。 須料培养瓶，培养板，冻存管： 其他消毒方法：有