细胞培养入门篇.docVIP

细胞培养从头学 一、常用设备 准备窣的设备： 单蒸倔水蒸倔器、双蒸镭水蒸镭器、酸缸、烤箱、高床锅、储品柜（放置未消毒 物站）、储晶柜（放置消毒过的物甜）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电 子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室 搅拌溶液）。 2 .培养室的设备： 液氮罐、储站柜（存放杂物）、口光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱 （-80°C）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。 必须放在无菌间的设备： 离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、C02孵箱（孵育培养物）、水 浴锅、三氧消毒杀菌机、4°C冰箱（放置serum和培养用液）。 二、无菌操作 （-）无菌室的灭菌： 1?定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自來水拖地、擦桌子、超净工作台等， 然后用3%。来苏尔或新洁尔灭或0. 5%过氧乙酸擦拭。 C02孵箱（培养箱）灭菌：先用3%。新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭或者 0.5%过氧乙酸，再用紫外灯照射。 3?实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统20-30分钟。 4?实验后灭菌：用75%酒精（3%。新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的 载物台。I （二）实验人员的无菌准备: 1 ?肥皂洗手。 2?穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋。 用75%酒精棉球擦净双手。 （三）无菌操作的演示： 凡是带入超净T作台内的酒精、卩BS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒 精擦拭瓶子的外表面。| 靠近酒精灯火焰操作。 器皿使用前必须过火灭菌。 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用吋仍要过火。 5?各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 吸取两种以上的使用液吋要注意更换吸管，防止交叉污染。 三、器械的清洗和消毒 （-）玻璃器械洗消： 新的玻璃器皿的洗消： 自来水刷洗，除去灰尘。 2?烘干、泡盐酸：烤箱屮烘干，然后再浸入5%稀盐酸屮12小时以除去脏物、 铅、神等物。 3?刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净 后用烤箱烘干。 4?泡酸、清洗：用清洁液（重钻酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸懈水1000ml）浸 泡12小吋，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸倔水冲洗3-5 次和用双蒸水过3次。 5?烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 6?高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气 成直线上升吋，关闭安全阀，当指针指向15磅吋，维持20-30分钟。 高压消毒后烘干 旧的玻璃器皿的洗消： 刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液屮，泡过 來苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 2?泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小吋后从酸缸内捞出器皿立即 用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃丄难以清洗），再用蒸懈水冲洗3 次。 3?烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消 毒储存及防止灰尘和再次被污染。 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着 温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5分钟后，关闭安全阀，气丿玉 表指数随之上升，当指针指向15磅时，调节电开关维持20-30分钟即可。（玻 璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖I：） 烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。 （二）金属器械洗消: 金属器皿不能泡酸，洗消吋可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75% 酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸倔水冲洗，再烘干或空气屮晾干。|放入铝制 盒内包装好在高压锅内15磅高压（30分钟）消毒,再烘干备用。 （三）橡胶和塑料: 橡胶和制詁通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自來水和蒸惚水冲 干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序： 针式滤器帽不能泡酸液，用N0【【泡6-12小吋，或者煮沸20分钟，在包装之 前要装好滤膜两张，安装滤膜吋注意光面朝上（凹向上），然后将螺旋稍微拧松一 些，放入铝盒屮在高压锅内15磅30分钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取 出使用吋应该立即将螺旋旋紧。 2?胶塞烘干后用2%氢氧化钠溶液煮沸30分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30 分钟）,自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸镭水, 三蒸水洗净，烘干。|最后装入铝盒内高爪消毒，烘-干备用。 胶帽，离心管帽烘干后貝能在2%氢氧化钠溶液屮浸泡6-12小时（切记吋间 不能过长），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸 锚水，三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒内高用消毒，烘干备用。 胶头可用75%酒精浸泡5分钟，然后紫外照