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细胞培养从头学-从最基础的地方教起，一步一步详细介绍细胞培养技术, 非常好的开门教程 常用设备 淮备室的设备： 单熬懈水蒸憎器、双蒸懈水蒸饰器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放 置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称最药品）、PH il （测量培养 用液PII值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80°0、空调、二 氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）o必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、 倒置显微镜、C02孵箱（孵育?培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、JC冰箱（放置serum和培养用 液）。 无菌操作 无菌室的灭菌： 定期打扫无菌室：毎周打扫一次，先用自來水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3%。來苏尔或 者新洁尔灭或者0. 5%过氧乙酸擦拭。 C02孵箱（培养箱）灭菌：先用3%。新洁尔灭擦拭，然后用75%酒将擦拭或者0.5%过氧乙酸，再 用紫外灯照射 实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟 实验后灭菌：用75%酒粘（3%。新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 实验人员的无菌准备： 肥皂洗手。 穿好隔离衣、带好隔离帽、I I罩、放好拖鞋 用75%酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示： 1?凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白幅的瓶了均要III 75%酒将擦拭瓶子的外表面 靠近酒精灯火焰操作。 器川I?使用前必须过火灭菌 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。 各种操作要靠近酒粘灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消： 一、新的玻璃器川L的洗消： 自來水刷洗，除去灰尘。 烘干、泡盐酸：烤箱屮烘干，然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砂等物。 刷洗、烘干：12小时后立即用自來水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干挣后用烤箱烘干。 泡酸、清洗：用清洁液（重俗酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸他水1000ml）浸泡12 小时，然后从酸缸内捞出器川L用自來水冲洗15次，最后蒸憎水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。 烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关 闭安全阀，当指针指向苗傍时，维持20-30分钟。 高压消每后烘干 二、旧的玻璃器皿的洗消: 刷洗、烘干：使用过的玻璃器川I?可血接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过來苏尔溶液（洗涤剂） 的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 2?泡酸、清洗:烘干后泡入清洁液（酸液〉，12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免 蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗〉，再用蒸他水冲洗3次。 烘干、包装：洗干净的器1111?烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘 和再次被污染。 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀 冒出蒸气,当蒸气成直线冒出3-5分钟后,关闭安全阀,气压表指数随之上升,当指针指向15磅时, 调节电开关维持20-30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上〉 烘干备用:因为高压消毒后器1111■会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。金属器械洗消： 金属器川〕.不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自來水冲干净，然后用75%酒精擦拭，再用自 來水，然后用蒸他水冲洗，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压（30分 钟）消毒，再烘干备用。 橡胶和塑料： 橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自來水和蒸懈水冲干净，再用烤箱烘 干，然后根据不同品质进行如下的处理程序： 1 ?针式滤器帕不能泡酸液，用NaOH泡6-12小时，或者煮沸20分钟，在包装之前要装好滤膜两张， 安装滤膜时注意光面朝上（凹向上），然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15磅30分 钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。 胶塞烘干后用2%氢置化钠溶液煮沸30分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30分钟〉，白來水洗 净,烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自來水，蒸谓水，三蒸水洗挣，烘干。最后装入铝盒内 高压消毒，烘干备用。 胶帽，离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时（切记时间不能过长），自來水 洗净,烘干。然后再泡入盐酸液30分钟,再用自來水，蒸馆水,三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒 内高压消毒，烘干备用。 胶头可用75%酒耕浸泡5分钟，然后紫外照射后使用即可。