细胞培养基本方法.docVIP

操作台基本要求: BB 2.1. iS合慣用右手的工作人员的垢矗细齐通凤?豪*布JS?憤用左于的工作人员可相应绘调雙工作台8B 上詢品的擢放（＜21＜ 随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于?20°C 或?80°C冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低。 细胞污染： （1）细菌污染 A B 图22楼盘相羞图H见示站壁生饮的293担嵐枝大爲杆AS污绞?低偌昱0血下可见站■炬魁闯的区域存衽一 些播建发売的力小WW. ＜0是各个畑色不易区分（AS）＜将出色方晅区域邊一步成大后可以凤示出各个大肠 杆fiS细18?这些妇韵通常为杆状.的2pm长.宜艮约05pm＞图A中駅色方晅的?边低度均为100pm. （2）酵母污染 品稳需霜匸时凤示^站的”吓污汎污树斯确环眈■乩复制时詁生 （3） 霉菌污染 初期PH值维持稳定，污染严重后PH值迅速升高，导致培养基浑浊。 （4） 病毒污染 一般不会对?其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、 一组抗体的免疫染色，ELISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出 细胞为病毒污染。 （5） 支原体污染 唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自显 影 4?抗生素只能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出 5-适合贴壁的细胞和悬浮的细胞 越■培养 悬浮培养 潘合包括原代细胞在内的大多数细8类型? 适合己谥应悬浮焙养的细臆以及其他一业无 粘阳性的细胞（例如：造血堆脂）. 需要定朗传代.但是易于通过倒責显建镜 9,9. 较易传代.但是需要每天进行细胞计数和存 活眾测定.以监测生长損式：可将培养物稀 释以弼3?生长. 利用SB （例如：TrypLEwExpress.胰萸白3） 或机械方法報厲姙腿? 无爲通过弗或机械方法解离细胞. 妇胞生长受襄而积限制.因而产■受限? 妇胞生长受到其左培养基中浓度的限制.易 于扩大培养規模? 需要便用经过组铁培养处理的容器? 可便用未经组织培养处理的容器逬行培养. 但SSft动（即：摇晃或搅样）以便进行充 分的％体交換? 可连1*收获产物.用于细88学研究等多种研 究领域? 可批■收荻产《!?用于蛋白质的大■生产及 多种研究领域? 慕础培养基，减血清培养基，无血清培养基 PH值：大多数止常哺乳动物细胞系PH为7.4； 成纤维细胞系适合轻度偏碱（pH7.4-7.7） Sf9和sf21等昆虫细胞系最适合在PH值为6.2的环境中生长 温度： 大多数人和哺乳动物细胞系在36°C至37°C最佳 昆虫细胞在27°C为最佳 禽类细胞在38.5°C最佳 冷血动物（15°C?26°C） 动物细胞形态划分： ?成纤维细胞，贴附生长 ?上皮样细胞呈多角形，贴附 ? 淋巴母细胞样细胞呈球形，不贴附 ?特殊形态： I型有长突触 II型没有轴突 细胞增长模式 -05104 -05 104 0 2 4 6 8 10 天数 图4?1?圮养细處的負里生*11式图? it半对数图凤示了宏胞至度与坊齐时何Z何的关*? 1S齐的砂通寫茨厦标 冷生长模式增殆?个生长生长塡慢?处于适删弄巧壤.为快at生氏 做;■备的tt5＜哑席期ZM对帔vl ttm醱細整呈梅誥增鬼 酒只生toa弄事中的应齐*. 断有生*坊齐鼻 均叢艮尽（即：一科我多科皆齐累样M）我祷畑熬已占弼所有町用鼻廣时.血能即邊入存止覇（即??平台90. 駆連度大大的低甚至宪全停止? 11?何时传代？ ? 哺乳动物：生长的PH值通常表示乳酸储积，且有毒性，当PH迅速降低（） 0.10.2PH单位），同时细胞浓度增大，则应对细胞进行传代。 ?昆虫细胞PH值会上升但不超过6.4 12.贴壁细胞的解离 方廉 ?■作用 用逮 ■■ 見坊芥杠n?ft 的农削?有址分製电韵 时貞白?钛越的点■蔡：可住捋伤 一些?a? 談*白? 談*白??胶康? ■密MB.巳砂战多层纽构的 甜息??别址成軒缩！a廉 分敵■ 金影战完筌.汇合片层的我皮怕胳 从下耒.両不将 金? TryplE*M?? SiaSttM: BftVftB*白 n：卑夏便用■动詢鼻性试笊的 13?贴壁细胞的传代 所需材料 ?叢有■妲胞的憎养密25 ?直过组帜ia养处理的细养ta养板3养血 ?宪全生tea养星.SM5 3rc 一次性无flfi 15-＜nL试U 37X4HMI.充有二■化为s?的崖化空代 ?平氏盐落液?例如：杜尔貝科福酸北缓冲液（DPBS）.不含钙■貸和BHI MAM. MM）：談■白■ a TryplE-Express?不含1 ?用于洛妇*和2细感计数的试刑和设亂 例如：Countess?自动細熬计兹仅.台?童染 14和血球计数8L 或＜1 Couher Counter* （Beckman Cou