生物负载测定.pptVIP

2021/2/21 * 微生物采集技术和设备 接触板 接触板或玻璃片可用凝固的培养基放在样品表面上,使存活的微生物能附着到该培养基的表面,然后再培养接触板或玻璃片,至形成可计数的菌落。 该方法优点在于使用方便。结果与凝固培养基的接触表面直接相关。 表面上自然集聚的细胞群、菌落在琼脂表面散布、琼脂干燥、可能存在厌氧菌等都是潜在的不利因素。 由于该方法的回收率通常较低,所以只有在其它方法不适用的情况下才使用。接触板和玻璃片通常只适用于平的或规则的表面。 琼脂覆盖 当生物负载低以及产品构造适合时,在产品的表面涂上熔化的琼脂培养基（最高温度在45℃）,培养至产生可见菌落。 表面上自然集聚的细胞群、菌落在琼脂表面散布、琼脂干燥、可能存在厌氧菌等都是潜在的不利因素。 2021/2/21 * 微生物采集技术和设备 最大可能数（MPN法） MPN法是一种沿用已久并有充分文献根据,用于估算在产品内随机分布的存活微生物数量的方法。它主要用于食品和水产品等行业（与液体、粉末和半固体的产品或者原材料一起使用）。这种方法尤其适用于生物负载平均数低的产品。 这种方法包括（按体积或者重量）对产品进行重复取样,其中每次取样的样品中均含有相同数量的可存活微生物（因而要求分布的随机性）,然后通过将样品转到液体培养基并培养,单独记下有可存活微生物存在的每个样品。当具有足量的洗脱液,可将其一系列的稀释液接种于营养培养基中,使部分接种的培养基在随后的培养中不产生可见生长。用表现出生长的稀释度,估算出样品中或产品取样的绝大部分中存在的存活微生物的数量;关于此估算值,95%的可信区间是相对宽的。该估算和其置信界限来自MPN表格（DeMan[18]）,此表是在一定的假设条件下编制的,即根据泊松分布原理,重复取样样品中存在的可存活微生物的数量是围绕一个平均数量分布的。 MPN方法应用的关键要求是微生物总数在整个（研究中的）产品上随机分布。因此,对于液体用的医疗器械、黏性液体、粉末,或在单一产品使用如洗脱液等液体估算生物负载的情况下,MPN方法可以有生物负载测定值。但是,这种方法并不普遍适用于在固体医疗器械上的生物负载测定。典型的情况是,在这些器械上构成低平均值生物负载的若干微生物的分布通常是随机的,一个总数的微生物总是有高比例的不可检测的有机物和少量的带“峰值”的微生物（实质构成平均值生物负载）。在MPN的应用中,“峰值”将会被简单地记录为一个正值,因而,只以公式化的方式构成此平均值,而不是用数字表示。这可能导致对生物负载估计过低,而得出一个不符合要求的结果。 MPN法易于操作,并且该方法是基于统计学,所以它更适用于一般性评估而不是精确测定。 2021/2/21 * 微生物采集技术和设备 膜过滤法 洗脱液过滤后,将滤器放到适宜的培养基上进行培养,形成可见菌落,是对存活微生物计数的一种有效方法。通常,孔径不大于0.45μ的过滤器适于采集微生物。 对含有类似纤维状产品残留物等微粒的洗脱液进行膜过滤可能比较困难,因微粒会阻塞过滤器。 膜过滤法更适用于微生物浓度较低的悬液。 2021/2/21 * 微生物采集技术和设备 平板倾注 使用平板倾注技术,将一定量的悬浮液在在约45℃的温度与融化的琼脂相混合,然后倾注到平板放至凝固。对平板进行培养至菌落形成并进行计数。 平板涂抹 平板涂抹技术是用涂抹器将一定量悬液涂在固体营养基表面。 螺旋涂板 螺旋涂板技术运用自动装置将一定量微生物悬液涂在固体培养基表面上。悬液涂抹是以递减的速度从培养板中心以螺旋线轨迹向周边运动。经过培养后,对全板或部分板,运用专用的计数栅和计数技术来统计原始悬液中的存活微生物数量。 2021/2/21 * 微生物采集技术和设备 检测微生物的其它方法 估计生物负载时还可使用菌落计算以外的其他方法。这包括测定新陈代谢物的活性（例如:新陈代谢物测定或落射表面荧光）。这些方法称为“间接法”,为了建立起与以往确定的存活微生物数量的关系,它们必须对照菌落计数进行校准。这些技术的一个主要限制就是需要相对较高的微生物数悬浮在样品洗脱液中。一般来说,所检测到的微生物数量的下限超过100 CFU。 2021/2/21 * 微生物鉴定（一） 微生物鉴定的方式和意义 方式 形态鉴定、培养及生理特征、生化特征、 核酸特征鉴定 数值鉴定和自动鉴定 意义 从鉴别污染微生物可了解洁净室清洁,消毒步骤的效性,特别是对消毒剂有效性评估有所帮助。微生物鉴别的结果也对调查污染的来源有参考价值。 2021/2/21 * 常用的微生物操作技术 接种:将含有或可能含有微生物的样品或培养物,种入培养基的技术方法。 斜面培养基接种法、半固体培养