基因工程的流程标准操作程序.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序;;课前自主学案;;（2）利用PCR技术扩增目的基因 ①PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 ②条件：已知基因的_____________。 ③过程：目的基因受热解链形成 ________，与引物结合，在DNA聚合酶的作用下延伸形成DNA。 ④方式：指数扩增=2n(n为扩增循环的次数) （3）人工合成法：若基因较小、核苷酸序列已知，可以人工合成。;二、基因表达载体的构建 1.表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+________。 2.表达载体的功能 （1）使目的基因在_________中稳定存在，并且遗传给下一代。 （2）使目的基因表达和发挥作用。 3.启动子：位于基因的首端，它是_________识别和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 4.终止子：位于基因的尾端，终止____________。 5.标记基因：_______________是否含有目的基因。;三、将目的基因导入受体细胞 转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 1.将目的基因导入植物细胞的方法 （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染______植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力；Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 ②转化过程：目的基因插入到Ti质粒的T-DNA进入 农杆菌 导入植物细胞 稳定维持和表达。 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法;2.将目的基因导入动物细胞的方法 （1）方法：显微注射技术。 （2）操作程序：目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵发育 新性状动物。 3.将目的基因导入微生物细胞的方法 （1）原核生物特点：繁殖快、多为_______、遗传物质相对较少。 （2）转化方法：Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子。;四、目的基因的检测与鉴定 1.检测 （1）方法：采用____________技术、抗原—抗体杂交技术。 （2）内容： ①检测转基因生物的__________上的目的基因。 ②检测目的基因是否转录______。 ③检测目的基因是否翻译_______。 2.鉴定：个体生物学水平鉴定、抗病鉴定等。;;2.PCR技术扩增DNA，需要的条件是（ ） ①目的基因②引物③四种脱氧核糖核苷酸④耐高温的DNA聚合酶⑤mRNA⑥核糖体⑦能量 A.②③④⑤⑥ B.①③④⑦ C.①②③⑤⑥ D.①②③④⑦ 解析：选D。错误地把PCR技术扩增DNA的过程认为是DNA复制的过程，DNA复制的过程需要模板、原料、酶、能量，故误选B。;3.科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。;科学家又在有启动子、抗虫基因的 质粒中插入终止子(抗虫基因末端)， 导人棉花受精卵，结果长成的植 株才有了抗虫能力。由以上过程 推知，作为目的基因的载体 应具备的结构是（） A.目的基因、启动子 B.目的基因、终止子 C.目的基因、启动子、终止子 D.目的基因、启动子、终止子、标记基因 答案：D;4.目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是（） ①检测受体细胞是否有目的基因 ②检测受体细胞是否有致病基因 ③检测目的基因是否转录mRNA ④检测目的基因是否翻译蛋白质 A.①②③ B.②③④ C.①③④ D.①②④;解析：选C。目的基因的检测包括：检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是用DNA探针，使DNA探针与基因组DNA杂交。检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是用基因探针与mRNA杂交。最后检测目的基因是否翻译了蛋白质。方法是进行抗原——抗体杂交。;5.下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答： （1）在基因工程中，A→B为___技术，利用的原理是___，其中①为___过程。 （2）B→C为抗虫棉的培育过程，其中③过程常用的方法是___。要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：______________________________________________。;解析：在基因工程中，A→B为DNA扩增过程，又称PCR技术，利用的原理是DNA分子复制，