蛋白质变性与复性意义.pptVIP

第二节 蛋白质变性与复性Unfolding and Refolding;变性与复性;变性与复性;蛋白质结构蛋白质的结构层次;促进与维系蛋白质折叠和天然构象的作用力;促进与维系蛋白质折叠和天然构象的作用力;包涵体;包涵体;包涵体对分离纯化的影响;包涵体的分离;包涵体的溶解;包涵体的溶解;蛋白质的复性;蛋白质的复性;图3-15 大肠杆菌胞质中蛋白复性的一般过程 (a)直接表达产物： １，细胞裂解，包含体分离； ２，变性；３，再折叠。图中代表具有二硫键的情形，Ｒ代表—H或-SO3-；(b)融合蛋白：１，２同(a)，３，释放重组肽链；４，再折叠。;蛋白质的复性;蛋白质的复性;稀释复性法; ②机械破碎——膜分离除可溶性蛋白——变性剂溶解包含体——除变性剂复性； 路线②应用膜分离技术，用微孔膜除去可溶性蛋白质，但细胞碎片和包含体一起被膜挡住，难以分开；而且膜的堵塞和浓差极化常常导致可溶性蛋白质的滞留。优点：封闭式操作，不污染环境也不受环境污染，能量消耗也比离心法少。 ;③化学破碎(加变性剂)——离心除细胞碎片——除变性剂复性。 路线③是用化学法破菌，所采用的试剂既可以破菌又可以溶解包含体，将两道工序合为一道，节省了设备和时间。缺点：所有的可溶性杂质都没有被除去，混杂在产物中间，给后分离带来困难。;稀释复性法;稀释复性法;稀释复性法;蛋白质复性时聚集反应的抑制;蛋白质复性时聚集反应的抑制;蛋白质复性时聚集反应的抑制;稀释法复性的缺点与改进的方案;透析复性法;色谱复性法;;　色谱法复性过程的示意图;凝胶过滤复性;亲合色谱复性;亲合色谱复性;亲合色谱复性;亲合色谱复性;离子交换色谱复性;各种色谱复性方法的比较;各种色谱复性方法的比较;反胶束萃取复性与稀释复性相比较;3、模拟体内蛋白折叠过程 在细胞内，内源肽链的折叠和聚集过程受分子伴侣和折叠酶的调节，因此，共表达分子伴侣或折叠酶可提高外源蛋白的可溶性表达。 4、温和溶解工艺相结合提高复性率 为减少蛋白质聚集，应采用一种适宜的再折叠过程，使中间体不变成有聚集倾向的结构，比如，疏水性基团不完全暴露。