仪器分析：第18章 色谱法导论.pptVIP

分离度与理论塔板数N的平方根呈正比。分离某“物质对”达到一定分离度需要的理论塔板数和柱长为： 影响分离度的因素包括三部分，第一项与区带扩张的色谱动力学因素N或H有关。第二项和第三项与分离选择因子、保留因子等色谱热力学因素有关。 要求基本获得分离：R=1,完全分离：R=1.5 表18-6列出R与α、k2和N的关系：α相同，保留因子k2越小，欲达到一定的分离度所需理论塔板数N越多；保留因子k2相同，α的微小增加，将导致所需理论塔板数N的显著减少。 18.4.3．分离速度及影响因素 在考虑组分分离时，另一个密切相关的因素是实现分离所需时间，既分离速度。完成分离所需时间决定于迁移速率较慢的组分，既组分2的迁移线速度u2。 式中 是保留值较高的组分2的洗出时间，代表完成分离所需时间；u是流动相线速度。此式表明分离时间是要达到分离度、相邻组分选择性因子、最后洗出组分的保留因子、柱效和流动相流速的函数。 在其它变量保持恒定时，分离度增加1倍，分离时间增加4倍。方程亦表明，流动相流速增加1倍或板高H减小1倍，分离时间减少将近一倍。 一定色谱操作条件下，色谱柱在一定时间能容纳达到一定分离度(R≥1)色谱峰的数量。 峰容量与样品容量有一定差别，后者指正常色谱条件下溶质在两相间有效分配洗出对称色谱峰容许的最大样品量，即K处在线性范围，超过此进样量将导致柱超负荷，溶质不能在两相间有效分配而出现色谱峰严重拖尾等畸变。色谱柱的峰容量越大，分离能力越强。 18.4.4. 色谱柱峰容量 18.5色谱方法选择和分离操作条件优化 通过色谱分离方程分析、初步实验数据估算，从易至难，采取各种技术手段，实现色谱分离操作条件优化。 18.5.1 色谱方法选择 根据样品物理、化学性质和分析要求选择色谱方法。 既可用气相色谱，亦可采用高效液相色谱分析的样品，通常首选气相色谱法，因为前者分析成本相对低些。 总体来看，高效液相色谱比气相色谱适用的样品类型、范围或应用领域要广得多。 18.5.2 分离操作条件优化 18.5.2.1.提高理论塔板数 根据（18-72），如果板高H已知，可求出获得一定分离度所需柱长。 增加柱长是提高理论塔板数最直接的方法。实际色谱分离条件优化过程中，一般根据试分离条件下的R1,N1或L1，在板高一定时，可估算达到更高或所需分离度R2要求的理论塔板数N2或柱长L2。 1. 适当增加柱长 18.5.2 分离操作条件优化 18.5.2.1.提高理论塔板数 2.提高柱效 柱效通常指单位柱长的理论塔板数N。据根板高方程，H随流动相流速u变化。 降低固定相填料粒径dP、固定相液膜或键合层厚度df ;采用低相对分子质量、低粘度流动相及适当提高柱温以改善传质等均有利于提高柱效。 18.5.2.2. 调节、控制保留因子 常用调控保留因子。一般k2增大可提高分离度，但分离时间会增长。下式可方便地将分离度、分离时间改写成k的函数： 和 分别为方程18-71 和18-73式的其他部分 左图说明，在Q,Q保持大致恒定条件下的关系图。它清楚表明，k10以上是不可取的，这时R很小的增大会导致分离时间显著增加，k为2左右分离时间最短，兼顾分离度和分离时间，k最佳值在2-10之间。 通常气相色谱采取改变柱温；气液色谱亦可改变固定液的量，即改变相比等调节保留因子。高效液相色谱在色谱柱或分离模式确定后，主要以改变流动相溶剂组成调控保留因子k。下图是高效液相色谱流动相溶剂组成变化对分离显著影响的典型色谱图。图中（C）是在最小分离时间获得一定分离度的最佳条件。 18.5.2.3. 提高选择性因子 根据分离度方程R正比于(α-1)/α。 α=1，R=0，两组分不可能分离; α略大于1，两组分才可能分离; α2-5，分离比较容易实现。α从1.01增大到5，(α-1)/α增加近100倍。 相比之下，k从1增大到50，k/(1+k)从0.5变化至接近于1，只增大一倍。 显然，α是影响R最敏感的因素。 保持k 在1-10的范围内，提高α值可采取下述措施： 1.改变流动相组成 改变二元或多元流动相组成，导致各组分间相对保留值变化。如果被分离组分也包含有可解离的酸或碱亦可改变流动相pH，以提高分离度和分离速度。各种流动相添加剂，如离子对试剂可提高离子性质分离选择性。这些主要适用于以高效液相色谱为代表的各种液相色谱方法 2.改变柱温 柱温既影响色谱动力学因素，亦影响热力学因素，是优化分离的重要操作条件，特别是对气相色谱。绝大多数选择因子α与柱温成反比，柱温降低，α升高。适当降低柱温，有利于提高分离度。然而不