仪器分析：第20章 高效液相色谱法.pptVIP

20.5.2.4.键合相色谱应用实例 相对分子质量10000的脂溶性样品一般采用反相色谱分离。 图20-20.极性氨基柱反相条件下分离糖类化合物物 20.5.3.离子对色谱(Ion-Pair Chromatography) 在色谱体系中引入一种与样品溶质离子电荷相反的离子对试剂，通常称为对离子或反离子(counterion)，它与溶质离子形成离子对，从而改变溶质在两相中的分配，使离子性溶质的保留行为和分离选择性发生显著变化。 常用的离子对试剂有提供阴离子的C4 - C8烷基磺酸盐、烷基硫酸盐、羧酸盐、萘磺酸盐、高氯酸盐等;提供阳离子的季铵盐和烃基胺，如四丁基铵盐、十六烷基三甲基铵盐、三乙胺等。 将离子对试剂涂渍在液液色谱的硅胶载体上或溶于流动相中，可构成液液离子对分配色谱，由于固定相的流失，这类离子对色谱应用不多。 在反相色谱中，离子对试剂加入缓冲液和甲醇、乙腈等极性有机溶剂的流动相构成反相离子对色谱。广泛应用于羧酸、磺酸 、胺、季铵盐、氨基酸、多肽、核苷酸及衍生物等有机酸、碱和两性化合物的分离分析。 20.5.3.离子对色谱(Ion-Pair Chromatography) 保留机理： 上式说明，溶质的k与KXY和流动相离子对试剂浓度[ Y- ]成正比。 KXY与溶质解离度、 对离子的类型及结构、性质有关。因此影响溶质保留和分离选择性的因素，除一般反相 色谱条件外，主要还有流动相缓冲液的pH应高于溶质的pK值，以确保溶质解离呈离子态； 离子对试剂具有适当烷基链、疏水性，在水溶性流动相有较好的溶解度，且可调节一定浓 度范围。因此改变离子对试剂的结构和浓度可以控制k值和提高a值。采用具紫外吸收的离 子对试剂可测定非紫外吸收试样，称为间接光度离子对色谱。反相离子对色谱的主要缺点 是反相键合填料适应pH范围（pH2~8）有限，若采用有机聚合物反相填料能扩大离子对色 谱应用pH范围，但有柱效低的缺点。 20.5.3.离子对色谱(Ion-Pair Chromatography) 反相离子对色谱分离水溶性维生素 手性色谱法（chiral chromatohgaphy）直接分离手性化合物对映体具有速度快、柱效高、操作简便、适用范围广的优点。 手性高效液相色谱可分为手性固定相(chiral stationary phase，CSP)/非手性流动相和非手性固定相/含手性选择剂流动相，即手性流动相两种色谱技术。CSP通常是将手性物质化学键合或涂渍在载体表面上制成。化学键合CSP通过含活性基团（如烃胺基）的有机硅偶联剂将手性物质键合到硅胶等基质表面，是当今主要CSP类型，已有100多种商品化。试样中对映体与键合的手性分子通过氢键、π-π、偶极、疏水、静电、包络和立体镶嵌等相互作用，形成瞬间非对映异构体络合或复合物的结合能力差异，实现对映体拆分。 采用手性固定相CSP的高效液相色谱体系的流动相与一般分配色谱相似，根据CSP与流动相相对极性不同可构成正相或反相色谱，其中采用极性水溶性流动相的反相手性色谱应用较多。 20.5.4.手性色谱(Chiral chromatohgaphy) 1.给体-受体手性固定相 这是Pirkle研究组最先开发的一类CSP,由含末端羧基或异氰酸酯芳香烃手性配体与氨基键合硅胶缩合，分别形成具手性取代芳香酰胺或脲型结构CSP，亦称为Pirkle手性固定相。 20.5.4.手性色谱(Chiral chromatohgaphy) 它们具有确定的化学结构，其共同结构特征是在手性中心附近 含有取代芳基的π电子给体或π电子受体的π-π作用基团；形 成氢键和偶极作用的极性基团；立体位阻的大体积非极性基团， 这些是三点作用手性识别模式的结构基础。 1.给体-受体手性固定相 20.5.4.手性色谱(Chiral chromatohgaphy) Pirkle CSP手性识别作用点 1.偶极-偶极作用点，2.立体位阻，3.π-π作用，4.氢键作用 2.多糖类手性固定相 主要是纤维素及其衍生物CSP，以引进芳环的取代苯甲酸酯衍生化纤维素居多，如纤维素三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)，纤维素三(4-甲基苯甲酸酯)，纤维素三乙酸酯等。 3.环糊精手性键合固定相 亦称为空穴型固定相。环糊精简称CD，具手性空穴结构，CD-CSP可实施正相和反相两种色谱体系。 20.5.4.手性色谱(Chiral chromatohgaphy) 4.蛋白质手性固定相 一般通过含氨基、二醇基等键合硅胶中间体将蛋白质键合至硅胶上。这类CSP只能用于反相色谱体系。 以生物活性配体(如酶、抗体、激素等)通过间隔臂键合到多孔微粒固体基质为固定相，不同pH值的缓