改良线栓法大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立.docVIP

精品文档（可编辑） 值得下载 PAGE1 / NUMPAGES1 改良线栓法大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立 【摘要】 目的：通过改良线栓法建立稳定的Wistar大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型。方法：60只雄性Wistar大鼠，参考Longa法并适当改进建立大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型30只，对照组30只。实验组结扎右侧颈总动脉近心端，夹闭颈总动脉远心端，颈总动脉剪一小口，从颈总动脉经颈内动脉插入线栓，缺血1 h后，在麻醉状态下完全拔出线栓，并结扎颈内动脉远心端。对照组结扎右侧颈内动脉近心端及远心端，但不插入线栓。术后取脑组织行TTC染色，并进行神经功能评定。结果：经改良线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型，成功率达82.75%，平均操作时间约（20.4±5.3）min，模型大鼠右侧眼裂变小，行走时向右侧转圈，模型大鼠神经功能评分均在3～4分，经TTC染色梗死侧大脑半球颜色苍白，脑梗死区范围一致，梗死体积约（34.62±5.32）%；对照组无任何临床症状，无神经功能缺失表现，经TTC染色无梗死灶。结论：通过改良，成功建立了Wistar大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型。 【关键词】 线栓法； 大鼠； 脑缺血； 再灌注 缺血性脑血管病（Ischemic cerebral vascular disease，ICVD）是神经科的常见病、多发病，缺血后再灌注损伤（ischemia-reperfusion，IR）较为普遍[1]。目前制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型中，线栓法大鼠大脑中动脉闭塞（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型能最大程度模拟人类缺血性卒中发生，被广泛用于实验性脑缺血再灌注（Ischemia-reperfusion，IR）损伤的研究[2]。传统的线栓法脑缺血再灌注损伤模型，多经颈外动脉插入线栓，通过颈内动脉到达大脑中动脉，以造成大脑中动脉供血区的缺血、梗死，缺血2 h后拔出线栓，形成再灌注损伤，从而成功制作模型[3-4]，但该操作需分离颈总动脉、颈内及颈外动脉，操作时间相对较长，对大鼠损伤较重。在本实验中，笔者通过改良，仅分离颈总动脉，颈内、颈外动脉近心端，在颈总动脉切一小口，将线栓经颈总动脉，通过颈内动脉插入至大脑中动脉，造成大脑中动脉供血区缺血，缺血1 h后拔除线栓，成功制备了MACO模型，现将该方法介绍如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 SPF级Wistar雄性大鼠60只，体重200～250 g，购自兰州大学实验动物中心。 1.1.2 主要试剂 3.6%水合氯醛，10%多聚甲醛，头端包被多聚赖氨酸、已消毒的MCAO线栓[型号2432-A4，线头直径为（0.32±0.2）、线身直径为0.24 mm]购自北京沙东生物技术有限公司。 1.2 方法 1.2.1 改良大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型的建立 参考Longa等的报道，随机选取30只雄性Wistar大鼠，术前12 h禁食，但不禁水。采用3.6%水合氯醛，对大鼠按1 mL/100 g体重的剂量进行腹腔注射麻醉后。剃须刀颈部皮肤备皮，取仰卧位，固定于手术台上，颈部用碘酒、酒精消毒后，取颈部正中切口，长约2 cm，切开皮肤及皮下组织，锐性分离颈前正中肌群，将肩胛舌骨肌向外侧牵拉，颈前正中肌群向内侧牵拉，暴露右侧颈总动脉，小心剪开包裹颈总动脉（common carotid artery，CCA）及迷走神经的鞘膜，将颈总动脉与迷走神经分离开，并沿CCA向远端分离出颈内动脉（internal carotid artery，ICA）及颈外动脉（external carotid artery，ECA）近心端，结扎CCA近心端，动脉夹夹闭CCA远心端，以5-0丝线在CCA中段放置一打好结的丝线，勿收紧线结，用显微剪将CCA近心结扎端远侧剪一小口，插入线栓，将丝线打紧，以保证线栓能自由活动，但又不经动脉破口渗血；松开CCA远端动脉夹，缓慢将线栓经CCA、ICA置入大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA），当出现阻力时即可停止前进，以湿的生理盐水纱布覆盖颈部伤口，线栓缺血1 h后，取下覆盖创口的纱布，在麻醉状态下，缓慢拔出线栓至CCA，结扎CCA远心端后，完全退出线栓，去除牵拉肩胛舌骨肌及颈部舌前肌群的缝线，缝合颈部皮肤。另设对照组30只，颈部正中切口，牵开颈部舌前肌群及肩胛舌骨肌，分离CCA、ECA及ICA，结扎CCA近端及远端，不插入线栓，操作完毕后，缝合肌肉及皮肤。两组大鼠术中均放置于恒温毯上，直至术后清醒。两组大鼠术后均连续3 d肌注青霉素4000 U/d。 1.2.2 大鼠神经功能缺陷体征的观察 所有大鼠均在模型成功后观察大