药学中的生物技术和方法2-抗体和免疫分析.pptVIP

2021/3/17 * CaN CaM:La3+ HRP StreptAvidin Biotin 2021/3/17 * RIA Assay 2021/3/17 * 免疫竞争结合分析---小分子抗原分析的基本方法 Ag + Ab AgAb + Ag + * Ag * AgAb + * Ag [*AgAb: Precipitant↓] 放射性计数 2021/3/17 * 常用分离沉淀技术 盐析法:饱和硫酸铵、硫酸钠 聚乙二醇法（w=6000） 特点: 快速,价廉,来源方便,受环境影响大 抗体免疫沉淀法 特点: 分离完全,非特异结合小，环境影响小，效价高，但成本高 固相吸附剂 2021/3/17 * RIA测量步骤 恒量的* Ag、Ab加入反应管中 加入待测样品、或标准品（已知浓度） 37℃或4 ℃温育 加入分离剂分离结合及游离部分 测定以总放射性为分母,测定* AgAb 为分子,计算结合%,以结合率为纵坐标,浓度为坐标，制作标准曲线 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度 2021/3/17 * 2021/3/17 * Calibration curve 2021/3/17 * ELISA（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay） 2021/3/17 * Sandwich ELISA 竞争法（略） 2021/3/17 * High Convenience High Sensitivity 2021/3/17 * 96-well plate 包被 封闭 结合 显色 酶标仪测定 hv 洗涤 洗涤 洗涤 终止 2021/3/17 * 酶的底物 邻苯二胺(OPD) + H2O2 TMB ABTS HRP的底物 氧化产物(橙红色) 492nm吸收 2mol/L硫酸终止反应 AP的底物 硝基苯磷酸酯 对硝基酚(黄色) NaOH终止反应 405nm吸收峰 磷酸4-甲基伞酮 （荧光底物） 2021/3/17 * 荧光偏振免疫分析 2021/3/17 * Principle of fluorescence polarization emitting dipole absorbing dipole ? excitation light polarized along z x z y I? I? detector 2021/3/17 * Fluorescence polarization immunoassay Ag + Ab AgAb + Ag + * Ag * AgAb + * Ag High polarized fluorescence Low polarized fluorescence 2021/3/17 * 偏振度r 2021/3/17 * 时间分辨荧光免疫分析 2021/3/17 * 荧光物质 荧光寿命(ns) 荧光物质 荧光寿命(ns) 非特异荧光背景 1～10 Sm3+ -β-NTA 65000 人血清蛋白 4.1 Sm3+-PTA 60000 球蛋白 3.0 Eu3+-β-NTA 714000 细胞色素C 3.5 Eu3+-PTA 925000 FITC 4.5 Tb3+-PTA 96000 丹黄酰氯 14 Dy3+-PTA 1000 罗丹明B 3.0 荧光背景和常用探针分子的荧光寿命 2021/3/17 * 2021/3/17 * Lanthanide labeling 2021/3/17 * Lanthanide labeling 2021/3/17 * Ligand labeling CTTA BCPDA 2021/3/17 * 镧系荧光底物法 2021/3/17 * DELFIA法 荧光试剂标记可以消除环境中稀土污染造成的荧光背景 2021/3/17 * 固相时间分辨荧光 2021/3/17 * 抗体 ---生物体自造的“magic bullet” 医 疗 直接或与毒素连结攻击 病变細胞 研 究 各种免疫分析 2021/3/17 * 抗体药物销售趋势图 2021/3/17 * 国际抗体药物 2009年美国