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2021/3/17 * 柱压力降 式中 η一流动相的粘度,MPa·s; k0—色谱柱的比渗透系数; dp—固定相颗较直径,μm; φ—色谱柱的阻抗因子; P1、P0—色谱柱的入口压力和出口压力,MPa。 返回 2021/3/17 * 柱渗透率 柱渗透率KF :表示流动相通过柱子的难易程度。在高效液相色谱法中,由于使用液体流动相,其粘度大于气体流动相,且固定相粒度又小,为保证柱子在较低压力下正常操作，总希望柱渗透率要大。 返回 2021/3/17 * 高效液相色谱的速率理论 其中:Cd为填充系数,为一常数; Cm是容量因子k的函数,为一常数,其值取决于柱直径、形状和填充状况,当柱填充均匀紧密时，其值下降; Csm是与固定相颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数以及容量因子k有关，为一常数; Cs是与容量因子k有关的常数； Dm为组分在流动相中的扩散系数，比气相扩散系数小4~5个数量级； Ds为组分分子在固定液内的扩散系数； 返回 2021/3/17 * §5-4 高效液相色谱流动相 一、液相色谱的流动相 流动相特性 流动相类别 流动相选择 选择流动相时应注意的几个问题 返回 2021/3/17 * （1）液相色谱的流动相又称为:淋洗液,洗脱剂。流动相组成改变,极性改变,可显著改变组分分离状况。 （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液-液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液-液色谱，非极性柱也称为反相柱。 组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 流动相的特性 返回 2021/3/17 * 流动相类别 按流动相组成分:单组分和多组分; 按极性分:极性、弱极性、非极性; 按使用方式分:等度淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、 乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性,以改进分离或调整出峰时间。 2021/3/17 * 流动相选择 在选择溶剂时,溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时:首先选择中等极性溶剂,若组分的保留时间太短,降低溶剂极性,反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序: 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 返回 2021/3/17 * 选择流动相时应注意的几个问题 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失;酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时,流动相不应有紫外吸收。 返回 2021/3/17 * §5-5 高效液相色谱梯度洗脱技术 一、单一洗脱剂: 二、等度洗脱:流动相的k值恒定 三、梯度洗脱:改变流动相的k值 梯度变化速率 梯度范围 返回 2021/3/17 * 等度洗脱 返回 2021/3/17 * 梯度变化速率 返回 2021/3/17 * 梯度范围 是指两种流动相起止百分比之差。 如（起）80%水:20%甲醇~20%水:80%甲醇（止） 初始的试探性实验可进行一次全范围梯度(即5—100％B)。B是指甲醇或乙腈等。 返回 2021/3/17 * §5-6 高效液相色谱类型简介 液-固吸附色谱 液-液分配色谱 离子交换色谱 离子色谱 排阻色谱 亲和色谱 高效液相色谱分离方法的选择 返回 2021/3/17 * 液-固吸附色谱 固定相:固体吸附剂为,如硅胶、氧化铝等,较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂; 流动相:各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理:组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸; 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样,对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。 缺点:非线形等温吸附常引起峰的拖尾。 返回 2021/3/17 * 液-液分配色谱 固定相与流动相均为液体（互不相溶）; 基本原理:组分在固定相和流动相上的分配; 流动相:对于亲水性固定液,采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定液的极性（正相色谱）,