自学内容基因工程基本操作.pptVIP

第六章基因工程的主要操作原理;第一节 DNA提取 ;DNA的应用： 构建基因组文库：100kb Southern杂交(包括RFLP)：50kb PCR分离基因等：50kb;因“材”施提 根据不同研究需要，保证结构的相应完整性 尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等) 保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子;1.大肠杆菌总DNA提取;自学内容基因工程基本操作;操作步骤;2.植物细胞总DNA提取;（1）CTAB法;经典的CTAB法使用两种缓冲液 高盐提取缓冲液：1％（冷冻干燥材料）或2％CTAB（新鲜材料）、0.7 mol/L或1.4 mol/L NaCl 沉淀缓冲液：1％CTAB，不含Nacl ; (2)SDS法 ;SDS 法的优缺点 优点：SDS法操作简单、温和，也可提取到分子量较高的DNA。 缺点：产物含糖类杂质较多。 该方法所得的DNA样品也可直接用于Southern杂交，但在限制性内切酶消化时需加大酶用量，并适当延长反应时间。;3.动物细胞总DNA提取;操作步骤;取上清加1/10 体积3 mol/L NaAc, 及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。 用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE中,-20℃保存。 如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5