肿瘤药理学实验方法(简).pptVIP

实体瘤动物体内移植模型的 主要特点 1.一群动物同时接种等量同种癌细胞,肿瘤生 长速度比较一致,个体差异较小; 2.接种的成活率高,接近100%; 3.对宿主的影响较相似,易于客观判断疗效; 4.可在同种或同品系动物中连续移植,长期保 留,供试验用; 5.试验周期一般较短,试验条件易于控制。 实体瘤动物模型主要用来筛选抗肿瘤药物。 2021/3/26 * 移植性动物肿瘤模型 实体瘤动物体内移植模型的建立 小块瘤体接种法 肿瘤细胞悬液接种法 培养细胞动物体内移植法 ●瘤体测量方法 ●接种方法 ●主要特点 2021/3/26 * 小块瘤体接种法 从动物剥离取出肿瘤后,剔除非肿瘤组织和坏死组织,选取生长良好而无变性坏死、呈淡红色 (黑色素瘤则呈黑色或黑紫色)、鱼肉状的瘤组织,切成2mm×2mm×2mm的小块,在所选宿主动物的腋下剪开一个小口,用无钩眼科镊子夹取小块,送入切口内皮。 如何保证切成的小块是2mm×2mm×2mm? 为什么接种在腋下,因为腋下部皮肤松弛,能使肿瘤生长得较大,可延长宿主动物的寿命。 实体瘤动物体内移植模型的 接种方法 2021/3/26 * 肿瘤细胞悬液接种法 将选取的肿瘤组织放入玻璃匀浆器中,用无菌生理盐水研磨后,经滤网过滤成单个的细胞悬液,用台盼蓝染色法计数活细胞数,每个接种点皮下注射0.2ml(含1×l06-1×l07个细胞),每只动物可选用一个或多个接种点,通常接种于腋下部皮下。 在无菌条件下操作。 实体瘤动物体内移植模型的 接种方法 1.研磨方向及转速 制备肿瘤细胞悬液时,在人工研磨时必须使研磨杆向同一方向转动,不可反向交替研磨,防止磨破肿瘤细胞;如果采用电动研磨,一定要控制好转速,以免破坏完整的肿瘤细胞。 2.细胞数 细胞数多少适中,如果瘤细胞数过多,接种后瘤体生长过快,不便于药物作用的观察;瘤细胞数过少,会导致接种失败,接种部位不能形成肿瘤。接种失败后再在原动物体内重新接种也难成功,必须重新更换动物。（为什么?） 肿瘤细胞悬液接种注意事项 2021/3/26 * 将培养至快要融合的单层细胞(对数生长期)用0.25%的胰蛋白酶消化脱壁以后,经用PBS或生理盐水以1000r/min经l0min离心洗涤2次后,洗掉细胞中胰蛋白酶和培养液中血清等成分,用台盼篮染色法计数活细胞数,用生理盐水将肿瘤细胞稀释成1×l06-1×l07/ml,每个接种点皮下注射0.2ml细胞。细胞悬液可置于冰上。 培养细胞动物体内移植法 实体瘤动物体内移植模型的 接种方法 2021/3/26 * 移植性动物肿瘤模型 实体瘤动物体内移植模型的建立 小块瘤体接种法 肿瘤细胞悬液接种法 培养细胞动物体内移植法 ●瘤体测量方法 ●接种方法 ●主要特点 2021/3/26 * 实体瘤动物体内移植模型 实体瘤瘤体测量方法 测量实体瘤生长的方法有多种,主要包括测定肿瘤的质量、体积或直径等。 瘤体测量方法 通常于停药之后次日处死动物,立即剥离取出瘤块,剔除其他组织后称重。若对照组小鼠肿瘤平均小于1g或20%小鼠的瘤重小于400mg,表示肿瘤生长不良。在治疗期间给药组小鼠死亡率大于20%或平均体重下降 (自身对照)超过15%者,表示药物毒性反应,应适当减量重复试验。 比较试验组与对照组瘤重的差异,按下列公式计算肿瘤抑制率。 肿瘤抑制率＝ ×100% 称量肿瘤的质量 当中药组的瘤重抑制率大于30%,需重复试验,连续数次疗效稳定,并经统计学处理有显著性差异时,则评定此药有一定疗效。 瘤体的直径与肿瘤的大小及质量成正比。测量瘤体的直径不需要处死动物,可用来动态观察瘤体的变化。 方法:用游标千分卡尺测量肿瘤的相互垂直的直径,取它们的平均值即为平均直径。 MD＝ ×100% MD为肿瘤平均直径;A、B、C为实体肿瘤3个相互垂直的直径,一般用毫米为单位。由于测量的厚度包括皮肤在内,故瘤体越小,产生的误差也就越大。注意由同一实验者测量。 瘤体测量方法 测量肿瘤的直径 2021/3/26 * 动物肿瘤体内实验方法 移植性动物肿瘤模型 ●人体肿瘤动物体内移植模型的建立 ●实体瘤动物体内移植模型的建立 ●非实体瘤动物体内移植模型的建立 2021/3/26 * 非实体瘤动物模型的建立 小鼠:6－7周龄,体重18－22g,组间平均体重相差不宜超过1g,健康,纯种、杂种或杂交第一代,同一种性别,一般用雌性动物接种。 接种方法:取出小鼠接种第5－7d的腹水,用生理盐水将细胞浓度稀释为1×l06-1×l07/ml,每只小鼠腹腔注射0.2ml细胞悬液即