体外抗菌实验-18.pptVIP

2021/3/27 * ? 4、金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属中致病力最强的一种菌,是人类食物中毒症的常见病原体,也常引起人体局部化脓性感染,严重者可导致脓毒败血症。目前规定,凡外用药物和眼科制剂不得检出该菌。 检验要点: (1)形态:革兰阳性球菌,葡萄状排列。 (2)分离培养及生化试验:见下表。 如分离培养的可疑菌甘露醇和血浆凝固酶试验均为阳性,则可判断为检出金黄色葡萄球菌。 2021/3/27 * 金黄色葡萄球菌的培养及生化特征 菌落特征 生化试验 卵黄高盐培养基 甘露醇高盐培养基 甘露醇 血浆凝固酶 金黄色,圆形, 凸起,边缘整齐, 外围有乳浊圈 黑色,圆形,凸起, 边缘整齐,外围有 黄色环 + + 2021/3/27 *  2021/3/27 * ? 5、破伤风梭菌 以植物的根、茎为原料的药品,常含破伤风梭菌的污染。如人体感染此菌后,可引起破伤风,其死亡率达50%。因此,用于深部组织、创伤和溃疡面的外用制剂不得检出破伤风梭菌 检验要点: (1)形态:革兰阳性芽胞梭菌,菌体细长,带芽胞的菌体呈鼓槌状。有周鞭毛,能运动,不形成荚膜。 (2)分离培养:葡萄糖庖肉培养基中生长,消化肉渣,使肉渣变黑,有特殊臭味。新霉素葡萄糖血平板上菌落蔓延生长,雾状、细丝状或羽毛状,边缘不整齐,常有β溶血环。 (3)毒力试验:小白鼠皮下注射菌液,6~48小时观察发病情况。出现典型的破伤风病症的,判定为阳性。 2021/3/27 * ? 螨:是一种小形的节肢动物,可污染药物制剂,使之变质失效,并可直接危害人体健康,传染疾病,引起皮炎、过敏性疾患或消化道、泌尿道和呼吸道疾病。因此,口服药及外用药中均不得检出活螨。 活螨的检查方法一般有: 直检法、漂浮法和分离法三种,最后都在显微镜下观察有否活动的螨,如有,即可判断检品检出活螨。 2021/3/27 * 第十二章 药物的微生物污染与控制 第一节 药物微生物污染源 一 生产环境 1 厂房 2 设备 3空气 二 生产原料 1 中草药 2 动物性药 2021/3/27 * 三、制药用水 四、生产人员 2021/3/27 * 第二节 微生物引发的药物变质 一、药物的物理性状改变 二、药物的化学成分变化 三、药物变质引发的不良后果 2021/3/27 * 第三节 防止药物微生物污染的措施 一、无菌技术应用 二、环境的无菌化 1 空气洁净技术要求 2 空气洁净常用技术 三、原辅料的无菌处理 1 原辅料 2 制药用水 3 包装材料的灭菌 2021/3/27 * 四、生产人员的无菌操作 1 一般生产区 2 洁净区 五、中药原料与中成药的灭菌 六、中药原料与中成药的存储与养护 （一）影响存储的因素 （二）养护措施 2021/3/27 * 菌种的选育与保藏 (一)菌种选育 1 自然选育: 不经过人工诱变处理,利用菌种的自发突变而进行菌种的选育。 e.g. BCG 2 诱变育种:利用各种诱变剂处理以提高基因的随即突变几率。 诱变育种的三个环节: （1）出发菌株的准备:纯种、产量稳定、特性稳定、对诱变剂敏感等 （2）突变的诱发: 2021/3/27 * ①物理诱变剂:电离辐射（X射线、γ射线等）、紫外线等。 ②化学诱变剂:烷化剂、嵌合剂、碱基类似物等。 ③生物诱变剂:噬菌体 （3）突变株的筛选: 筛选方法:随机筛选 理性化筛选 （四）突变基因的表达:研究最佳发酵条件 2021/3/27 * 3 杂交育种（selection by crossing) 选用已知性状的供体菌和受体菌株作为亲本,通过接合或原生质融合使遗传物质重新组合,再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。 （1）准性生殖(parasexual reproduction): 是真菌的一种导致基因重组的过程,有别于有性生殖。（重组体细胞和一般的营养体细胞没有不同,而且并不产生在特殊的囊器中;染色体交换和染色体减少是不规则的而且不协调的）。准性生殖过程包括异核体的形成、二倍体的形成以及体细胞交换和单元化。准性生殖过程中可出现很多新的基因组合。 异核体（heterocaryon）:如使一种类型细胞与另一种类型细胞融合,则可以形成一个同时含有二种以上基因型不同的核,但有一个共同的细胞质的细胞,这种细胞称为异核体。 2021/3/27 * （2）原生质体融合