食品微生物指标检测实验方案1.docx

精品文档 精品文档 PAGE PAGE7 精品文档 PAGE 微生物学实验方案 题 目：食品中微生物指标检测 班 级：2014级食品科学 小组成员：王亮 陆申凯万力叶宇家 指导老师：马爱民老师 时 间：2016年12月 一、意义 食品微生物指标是指某个或某批食品中微生物的存在与否（定性分析）或每个质量、体积、单位面积或每批产品中微生物存在的数目及其毒素（或代谢产物）的限制（定量分析），用以评价食品的微生物学卫生状况及其安全性。 在我国食品卫生标准中，通常微生物指标包括菌落总数、大肠菌群、致病菌等的检测，其中菌落总数和大肠菌群是必检项目，致病菌不得检出。 食品中微生物菌落总数指食品检样经过处理，在一定的条件下培养后，所得1mL或1g检样中所含菌落的总数，主要作为食品被污染程度的标志，常用 倾注平板菌落计数法。大肠菌群是指一群在37℃，24h能发酵乳糖产酸、产气，需氧或兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌，它反映了食品是否被粪便污染，同时 也间接地指出食品是否有被肠道致病菌污染的可能性，常用的检测方法是最大可能计数法。 二、目的 了解菌落总数、大肠菌群测定在食品卫生评价当中的意义 学习并掌握细菌分离和活菌计数的基本方法和原理 学习并掌握大肠菌群的检验方法 三、实验器材 1.食品检样：  VKD咖啡 2.培养基 平板计数琼脂培养基： 将蛋白胨  5.0g  、酵母浸膏  2.5g  、葡萄糖  1.0g  、 琼脂  15.0g  、蒸馏水  1000mL、pH7.0±0.2  加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH。分装试管或锥形瓶，  121℃高压灭菌  15min。 3.试剂与器皿 试剂 无菌生理盐水：称取8.5ｇ氯化钠溶于 1000mL蒸馏水中，121℃高压 灭菌15min。 器皿 灭菌锅、恒温培养箱：36℃±1℃、冰箱：2℃～5℃、天平、、恒温水 浴箱、无菌吸管：1mL、10mL或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量 250mL/3 个、500mL/3个 无菌培养皿：15个 试管：20个 容量瓶：100mL，3个 四、流程 1.样品的稀释 以无菌吸管吸取 25mL样品置盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶 玻璃珠玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 培养  （放 待琼脂凝固后，将平板翻转，  36℃±1  ℃培养  48h±2h。 菌落计数 可用肉眼观察，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单 位（CFU）表示。 选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总 数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于 300CFU的可记录为多不可 计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 结果与报告 菌落总数的计算方法：若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围 内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g mL）样品中菌落总数结果。若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算: 式中： N——样品中菌落数 C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； 1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； 2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU，则对稀释度最高的平板进 行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计 算。 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以 最低稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU～300CFU之间，其中一部分小 于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 大肠菌群五、进度安排 第一天玻璃器皿的清洗与灭菌；培养基的制备与灭菌；检样稀释与接种培养、其他器皿的准备 第二天观察 第三天菌落计数，计数 那是心与心的交汇，是相视的 莞尔一笑，是一杯饮了半盏的酒，沉香在喉，甜润在心。 我无所谓成功不成功，但我在乎我自己的成长；我无法掌握别人，但我可以掌握自己。 我唯一能把握的，是我会一直尽力走下去，不为了别人，为了给自己一个交代。 这个世界上有太多的事情是我们无法掌握的，你不知道谁明天会离开，你不知道意外和你等的人谁先到来。 最可怕的是因为怕失去而放弃拥有的权利。 我们都会遇到很多人，会告别很多人，会继续往前走，也许还会爱上那么几个人，弄丢那么几个人。 关键在于，谁愿意为你停下脚步？ 对于生命中每一个这样的人，一千一万个感激。有一些人、一些事是不需要理由的： 比如天空的颜色； 比如连你自己都不知道为什么会喜欢上的那个