双扩凝集反应-吴砂 教学课件.pptVIP

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* 抗原抗体四种力,疏水作用,氢键 沉淀反应与凝集反应 能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞,并能与之特异性结合的物质 B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异性结合抗原的一组糖蛋白。 抗原(antigen, Ag): 抗体(antibody, Ab) :  抗原-抗体反应的特点与影响因素 反应条件: 自身因素: 环境因素: 适宜温度 电解质 酸碱度 特点: 特异性 可逆性 最适比例 凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。 沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。 补体参与的反应 免疫标记技术(immunolabelling technique):用示踪物质标记抗原或抗体,进行抗原-抗体反应的检测。 抗原-抗体反应的基本检测方法 沉淀反应 ——双向免疫扩散试验 原理 用半固体琼脂凝胶作为介质,可溶性抗原、抗体在其中能自由扩散。将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上相对应的孔中,两者各自向四周扩散,如果抗原和抗体相对应,则在两者比例适当处形成白色沉淀线。 主要材料 器材:载玻片、EP管、微量加样器、枪头、打孔器、 试剂:PBS、琼脂粉、 Ag(正常小鼠IgG)、 Ab(兔抗小鼠IgG血清) 鼠IgG(Ag) 兔抗小鼠IgG(Ab) 免疫 配制1%琼脂-制板-打孔 稀释抗体:取4支EP管,将抗体倍比稀释 加样:1~5:抗体,中间孔抗原(10μL) 琼脂板放入湿盒内,置4℃,12-24小时后观察结果。 步骤 Ag 1 2 3 4 5 control 6 Fig. 2 加样法 从低浓度加到高浓度 50ul1/1Ab 50ul1/2Ab 50ulPBS 50ulPBS 50ulPBS 50ul1/4Ab 50ul1/8Ab 1/2 1/4 1/8 1/16 首先加入 首先加入 首先加入 首先加入 50ulPBS Fig. 1 倍比稀释法 1/4 1/1 PBS 结果判断 凝集反应 ——ABO血型鉴定 原理 颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体特异性结合,在有电解质存在的条件下,形成肉眼可见的凝集块。 基本类型 直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。 直接凝集实验(ABO血型鉴定) 间接凝集实验 将可溶性抗原连接于颗粒性载体,与抗体反应成凝集现象 间接凝集抑制实验 待检可溶性抗原与抗体结合后,抑制了连接载体的抗原与抗体形成凝集现象。 实验原理 人类ABO血型抗原主要有A和B两种,根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此,将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合,抗A或(和)抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集,据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 红细胞表面Ag 血清中Ab A型 A 抗B B型 B 抗A AB型 A、B —、— O型 —、— 抗A、抗B ABO血型的划分 3 3 3 1 ABO和Rh血型是与人类输血关系最为密切的两个血型系统。 当一个人的红细胞上存在一种D血型物质(抗原)时,则称为Rh阳性,用Rh(+)表示;当缺乏D抗原时即为Rh阴性,用Rh(-)表示。 Rh(-)的分布因种族不同而差异很大: 白种人中的比例较高,约15% 中国人群中; 新疆维吾尔等少数民族: 5%; 蒙古族人接近1%; 汉族人所占的比例极少,0.3% * 抗原抗体四种力,疏水作用,氢键

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