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第十章原核基因表达调控 Low Trp High Trp 第十章原核基因表达调控 Importance of attenuation （衰减作用的重要性 ） 第十章原核基因表达调控 A typical negative feed-back regulation Give rise to a 10-fold repression of the trp operon transcription (细调), increasing the regulatory effect up to 700-fold combining the 70-fold repressor effect (粗调). Faster and more subtle regulation of trp metabolism in bacteria. 诱导物使阻遏蛋白失活或使激活蛋白激活，则实现诱导。 辅阻遏物(Corepressor)使阻遏蛋白激活或使激活蛋白失活，则实现阻遏。 操纵子是原核基因表达调控的一种重要的组织形式 大肠杆菌的基因多数以操纵子的形式组成基因表达调控的单元。 基因的功能并不是固定不变的，而是可以根据环境的变化进行调节，使基因的概念又向前迈出了一大步 open reading frame (ORF) 可读框或开放读框：在DNA片段中 一种潜在的蛋白编码序列，它具有起始密码子、终止密码子和二者之间的密码子。 多蛋白：噬菌体、病毒转录物以及许多真核生物编码激素的mRNA（如阿里皮素原）翻译后先生成一条多肽链，随后被特定的蛋白酶切割，结果从一条翻译产物生成多个成熟蛋白质。未经切割的多肽链称为多蛋白 5’端有翻译起始密码 (DNA有义链上是ATG，转录成mRNA就是AUG) 3’端有翻译终止码 (DNA有义链上是TAA、TGA或TAG，转录成mRNA就是UAA、UGA或UAG) 开放读框（open reading frame) 核糖体结合位点(ribosome binding site, RBS) 核糖体沿mRNA移动，在合成完第一个编码的多肽后，核糖体可以不脱离mRNA而继续翻译合成下一个基因编码的多肽，直至合成完这条多顺反子mRNA所编码的全部多肽。 调节基因产物为调控蛋白 调控蛋白都是变构蛋白（allosteric protein），作用机理：蛋白质与核酸的相互作用 调控蛋白作用机理：蛋白质与核酸的相互作用，具体的说就是调控蛋白与操纵区结合 是指能被调控蛋白特异性结合的一段DNA序列，常与启动子邻近或与启动子序列重叠， 当调控蛋白结合在操纵元件序列上，会影响其下游基因的转录。不少操纵元件都具有类似的对称性序列，可能与特定蛋白质的结合相关。 如：阻遏蛋白与操纵子结合，就妨碍了RNA聚合酶与启动子的结合及其后b -半乳糖苷酶等基因的转录起始，从而阻遏了这群基因的表达。 乳糖进入肠道后，大肠杆菌会立刻制造出一些特殊的酶，其中最主要的为b-半乳糖苷酶，来吸收和利用作为细胞能源的乳糖。 法国科学家Monod和Jacob发现，大肠杆菌在不含乳糖的葡萄糖培养基中不会分泌b-半乳糖苷酶；相反，含有乳糖时，会合成b-半乳糖苷酶，使乳糖水解。 经过一系列的实验后，他们又发现，大肠杆菌在没有乳糖的环境中不产生编码b-半乳糖苷酶的mRNA。1961年，他们提出了一种模型即乳糖操纵子学说。 lacZ 编码β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)，它的活性形式是分子量约500kD 的四聚体，能催化β-半乳糖苷水解，例如，它能将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖 lacY 编码β-半乳糖苷透性酶(Permease)，它是分子量为30kD 的膜结合蛋白，是转运系统的组成成分，将β-半乳糖苷转入细胞。 LacA编码β-半乳糖苷转乙酰基酶(Transacetylase)，它将乙酰基团从乙酰辅酶A 转移到β-半乳糖苷上。 左端的LacI基因有它自己的启动子和终止子，LacI基因的末端紧接启动子P。操作基因O 占据LacZ 基因的前26bp，LacZ基因之后是LacY基因和LacA基因以及终止子。 围绕着乳糖操纵子转录启始位点，阻遏蛋白和RNA聚合酶的结合区域相互重叠。 操纵基因是mRNA起始点上游-5bp至转录单位内+21bp 的序列，因此它与启动子的右末端重叠 培养基添加诱导物(β-半乳糖苷)能迅速诱导Lac mRNA，稍后便合成该酶；若除去诱导物则合成迅速停止。 cAMP只有一个磷酸基团与糖环的3‘和5’相连。 分解代谢产物阻遏作用属于葡萄糖降低细胞内cAMP 水平的调控系统环节。cAMP 由 腺苷酸环化酶(Adenylate cyclase)催化合成。腺苷酸环化酶以ATP为底物，将核糖环上3￠5￠