核酸的物理化学性质.pptxVIP

第15章 核酸物理化学性质;一、核酸的水解;5′端;核酸的酸水解;核酸的碱水解;核酸的酶水解;核酸酶的分类Ⅰ;核酸酶的分类Ⅱ;二、核酸的酸碱性质;;;2、核苷的解离 戊糖可增强碱基的酸性解离 核糖中的羟基也可发生解离 3.核苷酸的解离 磷酸基使核苷酸具有很强的酸性;; DNA等电点为4～4.5； RNA等电点为2～2.5 ;三、核酸的紫外吸收;核酸溶液紫外吸收以摩尔磷的吸光度表示，摩尔磷即相当于摩尔核苷酸。;OD260的应用： 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 含杂蛋白及苯酚，降低 3.判断DNA是否变性;四、核酸的变性、复性与杂交; 某些理化因素破坏了氢键和碱基堆积力， 使核酸分子高级结构改变、理化性质及 生物活性发生改变。 不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变;降解：核苷酸骨架上3’，5 ’-磷酸二酯键的断裂; 高温（一般＞75℃）— 热变性 强酸、碱 — 酸碱变性 甲醛（Agarose中RNA ） 尿素（PAGE中DNA ） ; OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失;完全变性后核酸紫外吸收值增加： 天然DNA 25－40%、RNA 约1.1% 实质：碱基暴露;DNA变性;5、DNA热变性的特征; 指增色效应达50%时的温度 一般DNA Tm 值在85 - 90 ?C之间;（1）DNA的均一性： （2）G－C含量： 经验公式： XG+C＝（Tm－69.3）×2.44 （3）介质中的离子强度： ;(二)核酸的复性（renaturation）;DNA复性;分子量越大复性越难； 浓度越大，复性越容易； DNA复性也与它本身组成和结构有关 （具有很多重复序列DNA，复性快）。 减色效应（低色效应） ——;(三) 核酸的杂交;DNA-DNA 杂交双链分子; Southern杂交 Northern杂交 Western杂交;核酸的碱水解;核酸的酶水解;核酸酶的分类Ⅱ; 某些理化因素破坏了氢键和碱基堆积力， 使核酸分子高级结构改变、理化性质及 生物活性发生改变。 不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变;完全变性后核酸紫外吸收值增加： 天然DNA 25－40%、RNA 约1.1% 实质：碱基暴露;5、DNA热变性的特征;（1）DNA的均一性： （2）G－C含量： 经验公式： XG+C＝（Tm－69.3）×2.44 （3）介质中的离子强度： ;(三) 核酸的杂交