生猪屠宰企业非洲猪瘟检测实验室建设及生物安全技术要求.docx

生猪屠宰企业非洲猪瘟检测实验室建设及生物安全技术要求 一、 检测实验室建设要求 （一） 实验室布局 远离生产区，处于相对封闭区域。实验室面积需满足工作需要，原则上不低于 30平方米，至少包括独立的前处理室和检测室。前处理室面积原则上不低于20平 方米，检测室原则上不低于10平方米。前处理室应分为样品处理区、配液区等， 严格分区操作。 （二） 主要仪器设备及耗材配置 1、 前处理室主要仪器设备：配置离心机、高压灭菌锅、涡旋振荡器、水浴锅 （金属浴）、移液器及其配套吸头（样品处理区和配液区各一套移液器，不能混用）、 移动紫外灯，配备冷藏冷冻冰箱（存放检测试剂、检测样品、灭菌后废弃物）、储 物柜（存放EP管、PCR管、枪头等耗材）、垃圾桶2个（1个配黑色垃圾袋，用于 盛放普通垃圾；1个配黄色废弃物专用垃圾袋，用于盛放废弃物）o 2、 检测室仪器设备：荧光定量PCR仪或其他检测设备。 3、 实验耗材：采血器（或注射器）、真空釆血管（EDTA抗凝剂）、1.5mLEP 管及其管架、PCR八联管（与荧光PCR仪配套）及其管架、剪刀、银予、搪瓷托盘、 酒精灯等。 4、 其他器材：实验台、操作椅、试剂架、器皿橱等。 5、 个人防护用品：实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、一次性鞋套。 （三） 实验室检测人员 屠宰企业应配备专职检测技术人员，检测人员应接受实验室分子生物学检测技 术及生物安全相关知识培训，熟悉非洲猪瘟检测要求。 二、 检测实验室操作规范 （-）样品采集 生猪屠宰企业应安排专人负责样品采集，并填好釆样记录表（见附表1）。样 品为生猪抗凝血（5mL, 0. 5%EDTA抗凝，不能使用肝素钠作为抗凝剂）或全血样品。 （二） 样品保存 样品采集后，按要求进行混血，混血待检样品需在60-CT进行30min的灭活处 理，在12h内检测的待检样品应在冰箱冷藏（4C）保存，超过12h不能检测的样 品和留样需冷冻保存。留样应至少保存3个月，以备复査。 样品需转运的，应按农业农村部《高致病性动物病原微生物菌（毒）或者样本 运输包装规范》要求进行包装，并由专人将样品送至实验室，禁止使用公共交通工 具运送。 （三） 样品检测 严格按照试剂说明书的操作步骤进行检测。 采集的血液样品，可按照生猪批准次（车次）或一定的生猪数量进行混样， 具体混样数量根据所使用的检测试剤盒的技术指标科学确定。 待检血样必须充分混匀，使用经农业农村部批准或中国动物疫病预防控制中 心对比符合要求的检测试剂盒进行检测。 熟悉操作，缩短检测过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。 所有试剂开盖前都应先瞬时离心，避免液体飞溅；若液体不小心溅到手套或 桌面上,应立刻更换手套并清洁桌面。 样品处理、配液、扩增挡格分区操作，仪器、耗材等严禁交义混用。 加样时严禁反复吹吸。 荧光探针应避光保存，反应液现配现用，加入核酸后应尽快上机。 不要在荧光定量PCR管盖的采光部位做任何标记。 （四） 原始记录 检测完成后应填写并保存相关检测原始记录（见附表2）,检测原始记录、PCR 图至少保存2年。 （五） 检测报告 根据《关于全面开展生猪屠宰环节非洲猪瘟检测工作有关具体要求的通知》（川 动监[2019]5号）要求，屠宰企业检测结果应规范出具《检测报告》（见附表3）, 载明对应的检疫合格i正明编号、检测方法、检测日期、检测结果。检测报告必须经 由报告编制人、驻场官方兽医和批准人（场点负责人）签字确认，加盖屠宰企业公 章方为有效。检测报告一式两份，一份交驻场官方兽医存档，一份为屠宰企业自行 留存，保存期至少2年。 （六）结果处理 1、 检测结果为阴性，同批生猪产品上市销售。 2、 检测结果为阳性，应立即停止生产，将检测结果报告驻场官方兽医，并及 时将阳性样品送所在县级动物疫病预防控制中心，待复核后再做姓理。复核为问性 的按照《非洲猪瘟疫情应急实施方案（2020年版）》的规定采取应急处置措施处理。 三、检测实验室生物安全要求 （一） 采样生物安全 1、 正确穿戴好口罩、手套、鞋套、实验服等个人防护用品。 2、 尽可能使用物理设备保定动物，既保证人的安全，乂保证样品质量。 3、 一头猪一个注射器或一个真空釆血管，避免样品交又污染。 4、 釆样结束，釆样人员脱去个人防护用品，并对釆样环境清洁消毒。 （二） 检测过程中的生物安全 1、 检査样品外包装有无损坏，并对外包装进行消毒。 2、 注射器使用完后必须放置于专用废弃盒中待高压灭菌处理，高压灭菌前不 得拆卸针头和注射器。 3、 尽量使用带滤芯的移液器吸头，不用移液器混匀液体。 4、 对于管壁上沾有悬液的离心管，应短哲离心后再打开管盖。 5、 核酸提取完成后应在更换手套后再进行配液。 6、 配液区和核酸提取区严格分开，仪器、耗材等严禁交义混用。 =）检测后实验室消毒