医学遗传学课件：chapter 17 diagnosis.pptVIP

DNA probes and genes can be synthesized by automated solid-phase methods: ABI 310 DNA Synthesizer DNA sequencing : Sanger (dideoxy) method,using flurescent tagged ddNTPs. Denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC变性高效液相色谱 DHPLC是一项在单链构象多态性 (SSCP)和变性梯度凝胶电泳 (DGGE)基础上发展起来的新的杂合双链突变检测技术，可自动检测单碱基替代及小片段核苷酸的插入或缺失。 DHPLC具有高通量检测、自动化程度高、灵敏度和特异性较高、检测DNA片段和长度变动范围广、相对价廉等优点。 基本原理 将工作温度 (柱温 )升高使DNA片段开始变性，部分变性的DNA可被较低浓度的乙腈洗脱下来。由于异源双链 (错配的 ) DNA与同源双链DNA的解链特征不同，在相同的部分变性条件下，异源双链因有错配区的存在而更易变性，被色谱柱保留时间短于同源双链，故先被洗脱下来，从而在色谱图中表现为双峰或多峰的洗脱曲线。 Pathway of Gene Diagnosis 基因诊断途径 Direct diagnosis 直接诊断 Indirect diagnosis 间接诊断 For many genetic diseases, the responsible gene has been identified, and it is possible to molecularly examine the gene for mutations. Direct testing refers to direct identification of the DNA sequence change by DNA sequencing, or other methods, such as Southern blot or PCR assay. direct diagnosis--- detect mutant gene 直接诊断: 直接检测致病基因的突变. 通常使用基因本身或紧邻的DNA序列作为探针，或通过PCR扩增产物，以探查基因无突变、缺失等异常及其性质，这称为直接基因诊断，它适用已知基因异常的疾病。 当致病基因的某种突变类型与发病有直接的因果关系,或者对致病基因以及分子机制已完全了解,或者对致病基因以及分子机制部分了解但已知其中规律,可应用此途径。 Indirect testing is used either when the gene is not known but linkage with a genetic marker has been established, or when the gene is known but the mutation cannot be found. Linkage analysis is also the primary strategy through which most human disease genes have been discovered. Indirect diagnosis--gene linkage analysis 间接诊断:应用DNA多态为遗传标记进行连锁分析，确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出诊断. 当致病基因虽然已知但其异常尚属未知或突变类型较多时；或致病基因本身尚属未知时，但被检测基因有紧密连锁的DNA多态标记，可以通过对受检者及其家系进行连锁分析，以推断前者是否获得了带有致病基因的染色体。 连锁分析多使用基因组中广泛存在的各种DNA多态性位，特别是基因突变部位或紧邻的多态性位点作为标记。主要有 RFLP、STR、SNP三种. 遗传病的基因诊断方法选择 基因异常 方法 探针、引物或限制酶 基因缺失 基因组DNA印迹杂交\PCR扩增 缺失基因的探针 引物包括缺失或在缺失部位内 点突变 RFLP分析\ASO杂交 突变导致其切点消失的限制酶 PCR产物的多态性分析 正常和异常的ASO探针