2021年生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备.docVIP

2021年生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备 2021年生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备 PAGE / NUMPAGES 2021年生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备 坐骨神经腓肠肌标本制备和神经干动作电位观察与传导速度测定 试验目: 1.学习蛙类动物双毁髓试验方法。 2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本制备方法。 3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位基础波形, 并了解其产生原理。 4.学习蛙和蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度方法和原理。 试验材料: 1.试验对象: 蟾蜍 2.试验器材: 常规手术器械（粗剪刀、 手术剪、 眼科剪、 手术镊、 眼科镊）蛙板、 蛙钉、 探针、 锌铜弓、 玻璃分针、 培养皿、 任氏液、 滴管、 手术线、 PC机、 信号采集处理系统、 神经屏蔽盒等。 试验原理: 神经干在受到有效刺激以后能够产生复合动作电位, 标志着神经发生兴奋。假如在离体神经干一段施加刺激, 从另一端引导传来神兴奋冲动, 能够统计出双相电位, 加入在引导两个电极之间将神经干麻醉或损伤, 阻断其兴奋传导能力, 这时候统计出动作电位就成为单相电位。神经细胞动作电位是以全或无方法产生。不过, 复合动作电位幅值在一定刺激强度下是随刺激强度增加而增大。 假如在远离刺激点不一样距离处分别引导离体神经干动作电位, 两引导点之间距离为m, 在两引导点分别引导出动作电位时相差为s。即可根据公式v=m/s来计算出兴奋传导速度。蛙类坐骨神经干属于混合性神经, 其中包含有粗细不等多种纤维, 其直径通常为3-29um,其中直径最粗有髓纤维为A类纤维, 传导速度在正常室温下为35-40 m/s。 神经每兴奋一次极其在兴奋以后回复过程中, 其兴奋性都要经历一次周期性改变, 其全过程依次包含绝对不应期、 相对不应期、 超常期和低常期4个时期。为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生周期性改变, 首先要给神经施加一个条件性刺激引发神经兴奋, 然后在前一兴奋及其恢复过程不一样时相再施加一个测试性刺激, 用于检验神经兴奋阈值和所引发动作电位幅度, 以判定神经兴奋性改变。 四、 试验方法及步骤: 1、 坐骨神经干标本制备 （1） 破坏脑与脊髓: 取蛙一只, 用自来水冲洗洁净, 左手持蛙, 用食指下压其吻部, 拇指按压在其骶髂关节下方, 使其头尽可能前俯, 右手持探针沿两眼之间中线向后方轻划, 至触及头颈部正中凹陷处, 即为枕骨大孔位置。用探针在凹陷处垂直刺入枕骨大孔, 再将其针尖转向前刺入颅腔, 左右搅动探针, 根本捣毁脑组织; 然后缓慢地把探针退至枕骨大孔处, 将其转向后方, 与脊柱平行捻动探针使其刺入整个椎管, 根本捣毁脊髓。根本捣毁脊髓时, 可看到动物后肢忽然蹬直, 然后瘫软。 （2）剪去躯干上部及内脏 在骶髂关节前1 cm处用金冠剪（粗剪）剪断脊柱（可在下肢前端）。沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处, 将头、 前肢、 内脏及腹部软组织全部剪掉, 放于污物盘, 只保留下端脊柱和下肢。在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。注意切勿触及或损伤坐骨神经。 剥后肢皮肤 左手持镊子夹住脊髓断端, 右手捏住断端边缘, 剥掉全部后肢皮肤。注意不要握住或接触坐骨神经。将全部皮肤剥除后, 把标本置于盛有任氏液培养皿中。将手和手术器械洗净, 以免皮肤分泌物、 血液污染神经标本。 分离两腿 在任氏液里把标本上血迹冲洗洁净, 用镊子从背位夹住脊柱将标本提起, 剪去向上突出骶骨（避开坐骨神经）, 然后沿正中线用粗剪刀将脊柱分为两半, 再从耻骨联合中央剪开两后肢。将已分离标本浸入盛有任氏液培养皿中。 制备坐骨神经标本 取出一侧下肢, 用蛙钉固定于蛙板上, 固定时要注意使坐骨神经和腓肠肌朝上。先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经, 神经干应尽可能分离长部分。要求上自脊髓周围主干, 下沿腓总神经或胫神经一直分离至踝关节周围止。坐骨神经在膝关节后分为胫神经和腓神经两支, 如要制备腓神经, 则在分叉下端将胫神经剪断, 膝关节周围腓神经表面有肌肉和筋膜覆盖, 仔细分离并沿腓肠肌沟一直下行分离至跟踺, 然后将棉线用任氏液浸泡后, 在脊髓侧坐骨神经起始处和跟腱处将神经结扎, 在结扎外侧将神经干剪断, 制成坐骨神经-腓神经标本。另外, 也可保留胫神经而将腓神经剪断, 制成坐骨神经-胫神经标本。将制备好神经干标本浸于任氏液中数分钟, 待其兴奋性稳定后开始试验。注意在分离过程中, 应把神经周围结缔组织去除洁净, 并把神经细小分支剪断, 但要注意不要用金属器械碰触神经, 也不要对神经过分牵拉。试验期间应不停滴加任氏液使神经保持湿润。制备好标本应以下: 图1 坐骨神经腓肠肌标本示意图 神经干动作电位观察 （1）连接试验装置: 将刺激电极连接刺激输出,