生物化学第六章 RNA的生物合成.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 剪切（cleavage） RNase P切除5’端多余的核苷酸 RNase D切除3’端多余的核苷酸 RNaseP RNaseD 剪接（splicing）: 去除内含子序列 * 3 ’末端添加-CCA 核苷酸转移酶 ATP ADP * 稀有碱基的生成 尿苷 假尿苷 双氢尿苷 * 三. rRNA前体的加工 剪接 甲基化修饰 rRNA基因多拷贝，串联在DNA分子中 细菌：5～10 拷贝 果蝇：260 拷贝 人类：1100 拷贝 * (一) 原核生物rRNA前体的加工 * (二) 真核生物rRNA前体的加工 四、RNA催化的自剪接 核酶(ribozyme)是指具有催化作用的RNA，即化学本质是核糖核酸(RNA), 却具有酶的催化功能，可定点切割RNA靶分子，从而达到有效阻断基因表达的目的。 核酶的作用底物可以是不同的分子，有些作用底物就是同一RNA分子中的某些部位。 核酶的功能很多，有的切割RNA，有的切割DNA，有些还具有RNA连接酶、磷酸酶等活性。 * 四膜虫rRNA内含子的二级结构 四膜虫rRNA的剪接采用自我剪接方式 5′-端核苷酸序列 第四节 RNA的复制 * * 某些生物（如RNA噬菌体和动物病毒）携带单链RNA基因组信息，进入宿主细胞后，以自身RNA为模板，4种NTP为底物，由RNA复制酶催化合成RNA。 RNA复制酶 （RNA replicase） RNA指导的RNA聚合酶 （RNA directed RNA polymerase，RDRP） Thank you * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * RNA pol-σ识别DNA启动子(－35区) RNA pol与启动子 结合(－10区) DNA构象改变，启动子－10区处打开双链DNA分子（约13bp) 转录起始过程 转录开始，形成第一个3’,5’磷酸二酯键（不需引物） 核心酶沿模板向下游移动 （循环使用） * 核心酶沿DNA模板链向下游方向滑动 核心酶滑过的部位，DNA链很快恢复双螺旋结构 RNA链延长，暂时形成DNA?RNA杂交体（约8bp） RNA逐步脱离模板链 NTP以3’,5’-磷酸二酯键逐个相连形成RNA链，方向5’ 3’ 2. 转录延长（elongation） * 转录泡 (transcription bubble) 由DNA双链（打开约13bp）,RNA聚合酶与新合成的RNA链局部形成的结构 5? 3? DNA 核糖体 RNA RNA聚合酶 多聚核糖体 原核生物转录过程中的羽毛状现象 * 3. 转录终止（ termination ） 核心酶遇到DNA模板的终止信号（终止子） 核心酶不能继续滑动 核心酶从模板DNA上脱落 新合成的RNA链脱落，转录终止 * 1.不依赖?因子的转录终止 DNA模板上的终止信号处有特殊的碱基序列: GC富集区和AT富集区（终止子），使转录生成的RNA形成发卡结构和多聚U序列，促使转录终止。 不依赖ρ因子 依赖ρ因子 原核转录终止方式： * 2. 依赖?因子的转录终止 辅助识别终止信号 诱使RNA聚合酶构象改变 具有解螺旋酶活性，释放RNA产物 ?因子（6聚体蛋白质）： 二、真核生物的转录过程 * （一）转录起始（ initiation） 转录起始点 TATA盒 CAAT盒 GC盒 增强子 顺式作用元件(cis-acting element) AATAAA 切离加尾 转录终止点 修饰点 外显子 翻译起始点 内含子 OCT-1 启动子 * 转录因子 功能 TFⅡD TBP亚基结合TATA盒 TFⅡA 辅助TBP-DNA结合 TFⅡB 稳定TFⅡD-DNA复合物，结合RNA pol Ⅱ TFⅡE 解旋酶；结合TFIIH TFⅡF 促进RNA pol Ⅱ结合；作为其他因子结合的桥梁 TFⅡH 解旋酶；作为蛋白激酶催化CTD磷酸化 2.基本转录因子 3.　转录前起始复合物 ① 由TFⅡD中的TBP识别TATA盒，并在TAFs的协助下结合到启动子区，然后TFⅡB与TBP结合，同时TFIIB也能与DNA结合，TFIIA可以稳定与DNA结合的TFIIB-TBP复合体； ② TFⅡB-TBP复合体与RNA pol II-TFIIF复合体结合，此举可降低RNA pol Ⅱ与DNA的非特异部位的结合，协助RNA pol Ⅱ 靶向结合启动子； ③ TFⅡE和TFⅡH加入，形成闭合复合体，装配完成。 （二）转录延长（elongation） 真核生物