杂多钨酸盐抗念珠菌作用及其机制研究.pdfVIP

杂多钨酸盐抗念珠菌作用及其机制研究 侵袭性念珠菌病近年来呈不断增加的趋势,其上升速度远超过其他病原体。 免疫受损人群深部念珠菌感染的发生率约为11%sup4/sup0%,病死率超过 40%。 其中,器官移植受者念珠菌感染发病率为20%sup4/sup0%,而艾滋病患 者念珠菌感染发病率高达90%。系统性念珠菌感染患者的病死率很高,仅次于血 液系统肿瘤患者,是免疫低下患者死亡的主要原因,其一年总生存率很低,一般小 于20%。 这与艾滋病、糖尿病及恶性肿瘤患者等免疫受损人群的不断增多,广谱抗生 素、皮质类固醇、化疗药物的大量应用,器官、骨髓移植,侵入性技术的开展等因 素密切相关。现有的治疗深部真菌感染的药物主要包括唑类、多烯类、棘球白素 类等,存在种类少、毒副作用大等问题,某些药物的普遍使用所致耐药现象不断增 多,一些真菌对现有药物固有耐药,如克柔念珠菌、部分光滑念珠菌等均对氟康唑 天然耐药。 因此,开发新型高效、低毒的抗真菌药物对于有效治疗真菌感染,挽救患者生 命是非常重要的。多金属氧酸盐 （Polyoxometalates,POMs,简称多酸）是一类金 属-氧簇合物,是由过渡金属与氧原子高度聚合,通过自组装形成的具有空间网络 结构的无机化合物,可呈现出许多不同于单核配合物的生物活性。 该类化合物作为新型候选药物,具有合成简单、成本低、分子可灵活设计改 造、副作用小且理化特性（表面电荷分布、分子形状、酸碱度、溶解性等）优良 的优点。迄今报道具有各种药物活性的多酸200余种,主要集中在抗病毒和抗肿 瘤方面。 多酸抗菌活性研究较少,仅有日本的Yamase小组进行了相关研究,他们发现 十钒酸盐可以选择性抑制肺炎链球菌,多钨酸盐同β–内酰胺类抗生素具有协同 作用,可提高后者对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌活性。关于抗真菌的研究 则更少,国内开展了少数农业方面的抗真菌研究,国内外尚无多酸抗人类病原真 菌的系统研究。 本研究的目的是开发新型抗真菌活性多酸。首次选用杂多化合物为研究体系, 系统开展了杂多钨酸盐抗念珠菌的药学、体外和体内药效学、细胞毒性和急性毒 性研究,并从细胞和分子水平探讨其抗念珠菌作用机制。 在药学研究中,根据文献报道的方法合成了杂多钨酸盐α -1,2,3-Ksub6/subH[SiWsub9/subVsub3/subOsub40/sub] （代 号为SiW-3）、Ksub6/subPVsub3/subWsub9/subOsub40/sub（代 号为PW-6）、α-Ksub4/subPVWsub11/subOsub40/sub（代号为PW-8）、 Ksub13/sub[Ce(SiWsub11/subOsub39/sub)sub2/sub]·17Hs ub2/subO （代号为SiW-5）、Ksub13/sub[Eu(Si Wsub11/subOsub39/sub)sub2/sub]·25Hsub2/subO （代号为 SiW-10）。采用红外光谱、紫外光谱等方法,对受试化合物进行了结构验证和表征。 体外抗念珠菌作用研究中,按照美国国家临床试验室标准化委员会（CLSI） 颁布的微量稀释法（M27-A方案）,选择6种44株人类病原真菌,进行了体外抗 菌药物敏感性筛选,结果表明,5种受试化合物均具有不同程度的抗菌活性。钨硅 酸盐SiW-5的抗菌活性最高,MIC范围为lt;0.2sup1/sup0.2μM,对念珠菌 属的5个菌种以及新型隐球菌均表现出较好的活性。 结合多酸的结构分析,钨酸盐特别是高度负电性的夹心型缺位Keggin结构 的钨酸盐,具有更高的抗真菌活性。经体外药效学筛选,选取受试化合物SiW-5 开展细胞毒性、急性毒性、体内抗菌作用及其作用机制研究。 在细胞毒性实验中,选择人肾上皮细胞系293T 作为受试细胞,采用MTS 法来 初步观察SiW-5 对细胞的毒性。25sup8/sup00μ M 测试范围内的结果表 明,24h 的细胞抑制率未达 50%,48h 的ICsub50/sub为216.2μ M,72h 的 ICsub50/sub为99.5μ M。 可见,SiW-5 的ICsub50/sub剂量远高于其抗真菌的MIC 剂量 （lt;0.2sup1/sup0.2μ M）,证明其对人体细胞的安全性,可以用于进一步 的体内抗真菌作用研究。对70 只ICR 小鼠（雌雄各半）的经口急性毒性评价结 果表明,SiW-5 的LDsub50/sub为1651.5mg/kg,LDsub50/sub