TCID50与moi值的计算教学教材.docxVIP

TCI D5 0 与 mo i 值 的计算 TCID50 TCID50 :用细 实验四病毒感染力的滴定(TCID。的测定) 一、 实验目的 了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量 的操作步骤、计算方法及含义。 二、 测定病毒感染力的方法 半数致死量LD5o( 50% lethal dose):用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose) :用鸡胚来检测 半数细胞培养物感染量 TCID50(50% tissue culture infective dose) 胞来检测 蚀斑形成单位(plaque forming unit ，PFU :用细胞来检测 三、 材料 1、 长满单层的细胞1瓶 2、 胰酶、吸球、吸管、生长液 3、 96孔细胞培养板 4、 加样器、枪头 5、病毒液(PRV 四、TCID5。的操作步骤 1、 在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续 10倍的稀释，从io-1-io-10。 2、 将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共 8 孑L,每孔接种100 d。 3、 在每孔加入细胞悬液100 d，使细胞量达到2~3X105个/ml。 4、 设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100 d生长液+100 d细胞悬 液） 5、逐日观察并记录结果，一般需要观察 5-7天 结果的计算，按 Reed-Muench两氏法或Karber法 五、TCID50的计算方法 1、Reed-Muench两氏法 病毒液稀释度 出现CPE 孔数 无CPE孔 数 累 计 出现CPE孔所 占的% CPE孔数 无CPE孔 数 10-1 : 8 ’ 0 27 0 [100 (27/27) 10-2 J 8 k 0 19 0 100 (19/19) 10-3 7 1 11 1 91.6 (11/12) 10-4 3 5 ， 4 6 40 (4/10 ) 10-5 : 1 7 1 13 :0.7 (1/14 ) 10-6 0 8 0 21 0 (0/21 ) CPE Cytopathic effect 距离比例=(高于50伽变率的百分数-50%) / (高于50伽变率的百分数-低于 50%病变率的百分数) =(91.6-50 ) / (91.6-40 ) =0.8 lgTCID5°=距离比例X稀释度对数之间的差+高于50%^变率的稀释度的对数 =0.8 X-1)+(-3) =-3.8 TCID5q=103.8/0.1ml 含义：将该病毒稀释103.8接种100 d可使50%勺细胞发生病变 2、Karber 法 病毒液稀释度 出现CPE的孔数 出现CPE孔的比率 10-1 8 8/8=1 10-2 8 8/8=1 10-3 7 7/8=0.875 10-4 3 3/8=0.375 10-5 1 1/8=0.125 10-6 0 0/8=0 lgTCID5Q=L-d(s-0.5) L:最高稀释度的对数 D:稀释度对数之间的差 S:阳性孔比率总和 lgTCID5o=-1-1 x(3.375-0.5) =-3.875 TCID5o=1O-3875 /0.1 ml 含义：将该病毒稀释103.875接种100 d可使50%勺细胞发生病变。 什么是MO? MOI是multiplicity of infection 的缩写，中文译为感染复数。传统的 MOI 概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比 值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为 pfu。一般 认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是 pfu number/cell 。后 来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比 值。 然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使 MOI产生了不同的含 义。能产生细胞裂解效应的病毒例如腺病毒、单纯疱疹病毒等习惯上仍用 pfu 表示病毒数量，因此其 MOI的含义与传统的概念相同。而对于某些病毒如 AAV 病毒，无法用pfu表示病毒的数量，而是采用 TU IU、病毒颗粒(viral particles, v.p ) 或基因组数量(vector genome,v.g.)来表示病毒数量，因 此其MOI就有了不同含义。采用TU或IU , MOI的含义便是TU number/cell或 IU number/cell 。采用 v.p. ， MOI的含义便是 v.p. number/cell 。采用 v.g， MOI的含义便是 v.g. number/cell 。 可以将上述不同的MOI表示方式分为2种： 以活性单位表示病毒数量，如 pfu, TU, IU 。这时MOI的含义是指平均每 个细胞感染病毒的活性单位数。 以病毒颗