一种三重TaqMan荧光定量PCR检测试剂、试剂盒、检测方法和应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113106170 A (43)申请公布日 2021.07.13 (21)申请号 202110281112.9 (22)申请日 2021.03.16 (71)申请人 南京农业大学 地址 210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号 (72)发明人 粟硕　张文艳　梁家玮　李改茹　 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 曹翠珍 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/686 (2018.01) C12N 15/11 (2006.01) 权利要求书2页 说明书10页 序列表2页 附图4页 (54)发明名称 一种三重TaqMan荧光定量PCR检测试剂、试 剂盒、检测方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种三重TaqMan荧光定量PCR 检测试剂、试剂盒、检测方法和应用。该检测试剂 包括新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)、猫杯状病毒 (Feline  Calicivirus ,FCV)和甲型流感 (Influenza A virus,IAV)的特异性qPCR检测引 物和相应的TaqMan探针。该检测方法主要是针对 SARS‑CoV‑2、FCV、IAV设计了3对特异性引物和 TaqMan探针，并实现了在一个PCR反应管中同时 检测三种猫呼吸道病毒，其检测灵敏度可达到1 1 ×10 copies/μL，并具有极佳的特异性和重复 性，可以运用到宠物临床检测中。 A 0 7 1 6 0 1 3 1 1 N C CN 113106170 A 权　利　要　求　书 1/2 页 1.一种三重TaqMan荧光定量PCR检测试剂，其特征在于，包括SARS‑CoV‑2、FCV、IAV的特 异性qPCR检测引物和相应的TaqMan探针，具体如下： 用于检测SARS‑CoV‑2的引物序列及TaqMan探针序列为：上游引物N‑112F、下游引物N‑ 112R、TaqMan探针N‑probe； 所述N‑112F具有如SEQ  ID No.1所示的序列 所述N‑112R具有如SEQ  ID No.2所示的序列； 所述N‑probe具有如SEQ  ID No.3所示的序列； 所述探针N‑probe的5’端标记报告荧光染料为HEX，3’端标记荧光淬灭基团为BHQ1； 用于检测FCV的引物序列及TaqMan探针序列为：上游引物FCV‑106F、下游引物FCV‑ 106R、TaqMan探针FCV‑probe； 所述FCV‑106F具有如SEQ  ID No.4所示的序列； 所述FCV‑106R具有如SEQ  ID No.5所示的序列； 所述FCV‑probe具有如SEQ  ID No.6所示的序列； 所述探针FCV‑probe的5’端标记报告荧光染料为Texas Red，3’端标记荧光淬灭基团为 BHQ2； 用于检测IAV的引物序列及TaqMan探针序列为：上游引物IAV‑149F、下游引物IAV‑ 149R、TaqMan探针IAV‑probe； 所述IAV‑149F具有如SEQ  ID No.7所示的序列； 所述IAV‑149R具有如SEQ  ID No.8所示的序列； 所述IAV‑probe具有如SEQ  ID No.9所示的序列； 所述探针IAV‑probe的5’端标记报告荧光染料为FAM，3’端标