一种新型冠状病毒COVID-19-S1蛋白的表达和纯化方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112812156 A (43)申请公布日 2021.05.18 (21)申请号 202110359951.8 C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) (22)申请日 2021.04.02 (71)申请人 厦门宝太生物科技有限公司 地址 361000 福建省厦门市海沧区海沧街 道坪埕南路188号 (72)发明人 杨萍萍　 (74)专利代理机构 广州科沃园专利代理有限公 司 44416 代理人 张帅 (51)Int.Cl. C07K 14/165 (2006.01) C07K 1/36 (2006.01) C07K 1/34 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) C12N 15/50 (2006.01) 权利要求书2页 说明书7页 序列表3页 附图1页 (54)发明名称 一种新型冠状病毒COVID-19-S1蛋白的表达 和纯化方法 (57)摘要 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种新 型冠状病毒COVID‑19‑S1蛋白的表达和纯化方 法。本发明提供的方法，主要包括构建COVID‑19‑ S1蛋白表达质粒、将COVID‑19‑S1蛋白表达质粒 转化、培养表达COVID‑19‑S1蛋白、纯化COVID‑ 19‑S1蛋白等过程。本发明将能在293F细胞中高 分泌表达蛋白的信号肽与Kozak区和编码人 COVID‑19‑S1蛋白的基因进行重组，来提高目的 蛋白的表达量和分泌量。采用本发明提供的方 法，可以解决新型冠状病毒COVID‑19‑S1蛋白分 泌量低、纯度低的问题，为免疫学快速诊断、制备 A 单抗、开展解析蛋白结构研究等提供物质基础。 6 5 1 2 1 8 2 1 1 N C CN 112812156 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种新型冠状病毒COVID‑19‑S1蛋白表达和纯化的方法，其特征在于，包括如下步 骤： S1、构建COVID‑19‑S1蛋白表达质粒：选择编码COVID‑19‑S1蛋白的基因，根据293F细胞 偏好进行密码子优化，选择信号肽，将目的基因与选择出的信号肽连接，在信号肽前端引入 Kozak区，将优化后的基因序列克隆到pcDNA3.1‑myc‑HisA载体中，构建表达质粒，再用高纯 度质粒小提试剂盒提取质粒，用无菌水洗脱，用分光光度计测得质粒浓度为1mg/mL，获得 pcDNA3.1‑myc‑HisA‑COVID‑19‑S1质粒的目的DNA； S2、将COVID‑19‑S1蛋白表达质粒转化：取1μL步骤S1获得的pcDNA3.1‑myc‑HisA‑ COVID‑19‑S1质粒的目的DNA转化到Escherichia coli DH5α感受态菌株中，冰浴30min，42 ℃热激90s，再冰浴5min后，加入500μL的LB液体培养基，放在温度为37℃，转速为150rpm的 摇床培养1h；然后取30μL培养液涂布到含有氨苄抗生素LB固体培养板上，在温度为37℃的 培养箱中培养16小时后，从中挑选出单一菌落加入到含有氨苄抗生素的LB液体培养基中， 置于温度为37℃，转速为220rpm的摇床上培养16小时后，取状态良好的293F细胞于培养瓶 中，用天根高纯度质粒小提中量试剂盒提取，获得pcDNA3.1‑myc‑H