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一种鸭坦布苏病毒 摘要：为建立一种更好的鸭坦布苏病毒（DTMUV）检测方法，本实验室分离了一株DTMUV，并根据其E蛋白保守区域设计了一对扩增348bp目的片段的特异性引物，并对该引物进行了特异性试验。本研究建立了一种纳米PCR检测方法，并通过相关试验确定了最佳的纳米PCR检测方法，这种方法快速、灵敏。纳米PCR的最小检出量为3.7×10 鸭坦布苏病主要危害对象是蛋鸭，主要特点是蛋鸭产蛋下降1 材料1.1 病原实验室分离的鸭坦布苏病毒（DTMUV）、鸭病毒性肝炎（DHV）、鸭瘟（DPV）、鸭病毒性肠炎（DEV）毒株。1.2 试剂由全式金（北京生物科技有限公司）生产的Mark2K,Nano试剂盒。??2 方法2.1 引物设计以Gene Bank:KC136210.1?E基因为模板，应用primer5软件设计扩增DTMUV的E基因的348bp目的片段的引物。引物由瑞普公司合成。2.2 RNA的提取250μL病毒与750u L?Transzol混合，强烈振荡5min，静置5min；加250μL氯仿，剧烈振荡1min，静置5min,4℃，12000r/min,?15min离心；吸取上层液体600μL于EP管中，加等量异丙醇，混匀后，室温静置15min,?4℃,?12000r/min,?15min离心;?弃上清加900μL?DEPC水酒精，4℃，12000r/min,?8min;弃上清，离心12000r/min,?3min;?利用移液枪枪吸取剩余上清液，超真空干燥；最后加上9.5μL溶解液。反应条件优化?DTMUV最佳的纳米PCR反应体系为：2×Nano?Buffer12.5μL,F1为0.5μL,R1为0.5μL,c DNA为1μL,dd H敏感性的检测?模板浓度经检测为3.7ng/μL，为得到浓度梯度标准品，将模板用溶解液按10倍倍比稀释溶解，分别利用纳米PCR和普通PCR这两种方法对稀释后的模板进行扩增，比较二者的敏感性。特异性的检测?利用设计的引物对DTMUV、DHV、DPV、DEV进行特异性检测。3 结果3.1?从电泳图1可以看出，DTMUV的348bp的目的片段被成功检出。3.3?从电泳图3可以看出，4个病毒株中，只有DTMUV检出目的条带，其他病毒均未检出条带，无交叉反应。4 讨论鸭坦布苏最先是在2010年4月份我国南方部分地区发现，不仅感染种鸭，还感染各种蛋鸭，是一种新兴的传染病在临床应用中，各种不同的检测方法有不同的优缺点，较为常用的是普通PCR，但其敏感性不显著，效果不明显；LAMP缺点是对环境要求很苛刻，容易形成气溶胶，荧光定量PCR虽然较为精准，但需要精密昂贵的仪器并且操作程序复杂5 结论本研究表明纳米PCR的最小检出量为3.7×103.2?将电泳图2进行比较，Nano?PCR的敏感度可达10