革兰氏染色的机理和步骤..pdfVIP

1. 革兰氏染色的机理和步骤 机理 ：G+、G-主要由其 CW 化学成分的差异而引起对乙醇的通透性， 抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。 G+的 CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时 CW 脱水，孔径减 少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。 G- 的 CW ：肽聚糖层薄， 脂质含量高。 乙醇脱色时， 类脂被乙醇溶解， 透性升高，细胞被复染显红色。 步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀 涂布于水中。 ②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。 ③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。 ④媒染 : 以碘液媒染 1min，水洗，吸干水分。 (细胞内形成结 晶紫与碘的复合物，增强相互作用） ⑤脱色 (关键步骤）：以 95%的乙醇脱色 30s，应适当振荡均匀， 是乙醇脱色完全。 ⑥水洗，吸干。 ⑦复染： ??(第 2 张）复染 30s，水洗吸干。 ⑧干燥镜检。 2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。 芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及 皮层的离子强度很高， 这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核 心中水分， 其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水， 正是这种 失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。 3、引起微生物培养过程中 PH 变化的几种可能反应，并说明如何能 够维持微培 PH 稳定。 答：培养过程中， 由于营养物质被分解利用， 代谢产物的形成与积累， 会导致 PH 变化。 （第2 张中的图） 还与培养基的 C/N 比有关， C/N 高，经培养基后 PH 显著下降， C/N 低，经培养基后 PH 明显上升。 2 4 ， PH 调节：①加入缓冲剂 常用 :一氢二氢磷酸盐， K HPO 呈碱性 2 4 KH PO 酸性，只在一定的 PH 范围内调节（ 6.4--7.2） 3 3 ②大量产酸的菌株，加 CaCO 调节， CaCO 难溶于水，不会使培养 液的 PH 过度增加，但可不断中和微生物产的酸。 ③培养液中存在天然的缓冲系统，如 AA ，肽， Pr 均属两性电解质， 也起缓冲的作用。 2 3 ④过酸：治标 加 NaOH、Na CO 中和，治本 加适量氮源： NaNO3、Pr、NH3 ·H2O；增加通风量。 ⑤过碱：治标 H2SO4 、HCl 中和，治本 加适量碳源 :G 类，脂 类 ;减小通风量。 3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？ 抗生素法（青霉素法） ：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间 的交联，组织了合成完整的 CW ，野生型 B 处于正常生长繁殖，所以 对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺 B 在基本培养基上休眠状态 存活下来，从而达到浓缩营缺型目的。制霉菌素法适用于真菌，其可 与 cm 上？（第 1 张）醇作用，引起 cm 损伤，因为它只能杀死生长 繁殖着的真菌，所以 菌丝过滤法 :基本培上，野生型霉菌，？菌的孢子能萌发并长成菌丝， 而缺型孢子一般不萌发，或不能长成菌丝，因此培养一段时间后，用 灭菌脱脂棉或滤纸滤去菌丝， 收集滤液，重复数遍后可除去大部分野 生型，从而…… 4、生产蛋白酶的枯草芽孢杆菌发生遗传变异，使得产量性状