药物的含量测定.pptVIP

吸收系数 % 1 1 10 cm E M · = e 摩尔吸收系数(ε) 溶液浓度 液层厚度 百分吸收系数 溶液浓度 液层厚度 第三十页，共72页。 2.仪器的基本结构 钨灯（6～12V），产生320～3200nm的连续光谱，其适宜的波长是360～1000nm。 氢灯发射150～400nm波长的光，适用于200～400nm波长。 光源 单色器 吸收池 检测器 数据记录处理 第三十一页，共72页。 （2）吸收度的准确度 吸收度的准确性用基准重铬酸钾硫酸溶液检定60mgk2Cr2O7, 释稀1000ml，在规定波长处测定吸收度，计算吸收系数E，相对误差度在±1%以内。 （3）分辨率测定 波长(nm) 235(min) 257(max) 235(min) 235(max) 吸收系数-E 124.5 144.0 48.6 106.6 （1）波长的准确度 3.仪器的校正和检定 第三十二页，共72页。 《中国药典》2010版对吸光度的测定做了以下要求： （1）溶剂：要求：能溶解样品，挥发性小，对光波吸收少。 溶剂吸收度 （ 以空气为空白） 在220-240nm A＜0.4 在241-250nm A＜0.20 在251-300nm A＜0.1 300nm以上 A＜0.05 4.吸光度的测定 第三十三页，共72页。 （2）空白试验校正：采用空白对照，将溶剂装入吸收池，放入光路调节，仪器使吸收度为0（或透光率100%），然后再测样品。 （3）测定波长的核对：为了提高测定灵敏度，减少测定误差，吸收度一般应在 测定，测定样品的与文献记载对照，应在规定波长±2nm以内。 （4）供试品溶液的浓度：为了减少误差，应考虑使吸光度在0.3～0.7范围内 第三十四页，共72页。 （１）对照品比较法： （２）吸收系数法 ： （３）标准曲线法： 5.含量测定： 第三十五页，共72页。 (1)对照法 供试品溶液的吸光度 对照品溶液的吸光度 供试品溶液的浓度 对照品溶液的浓度 第三十六页，共72页。 (2)吸收系数法计算 第三十七页，共72页。 (3)标准曲线法 配制系列浓度的对照品溶液，在λmax处测吸收度A，做吸光度—浓度曲线，测试样品时，根据A在标准工作曲线上查C。 第三十八页，共72页。 （1）空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。 （2）测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池。 （3）在测定时或改测其它检品时，应用待测溶液冲洗吸收池3～4次，用干净绸布或擦镜纸擦净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损），放入样品室每次方向应一致。 （4）取吸收池时，应拿毛玻璃两面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及时用测定溶剂冲净，再用纯化水冲净，用干净绸布或擦镜纸擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。若吸收池内外壁沾污，用脱脂棉缠在细玻璃棒上蘸上乙醇，轻轻擦试，再用纯化水冲净。 （5）仪器经过搬动请及时检查并纠正波长精度，并应经常校准波长精度。 6.注意事项 第三十九页，共72页。 特点： 灵敏度高，可达10-10～10-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定 二、荧光分析法 第四十页，共72页。 第四节 色谱分析法 色谱法：是一种物理或物理化学分离分析方法。 分离机制：分配、吸附、离子交换、分子排阻及亲合色谱法 优点：高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快、应用范围广。 应用：各国药典中广泛用作纯度检查、含量测定。 分类： 流动相：气体→气相色谱法 液体→液相色谱法 固定相：固体或液体 气－固色谱法；气－液色谱法；液－固色谱法；液－液色谱法 操作形式：柱色谱法、平板色谱法、电泳法 第四十一页，共72页。 一、HPLC色谱法及定量方法 （一）主要参数： 1.基线：没有样品进入检测器时，噪音随时间的变化。 2.保留时间tR：从进样到组分色谱峰顶点的时间 进样 tR h 0.5h Wh/2 W t 第四十二页，共72页。 3.峰高h /峰面积：从最高点到基线的距离（峰与基线围成的面积）。 4.峰宽W：拐点作切线在基线上的载距。W越窄柱效高。 5.半峰宽Wh/2点：峰高一半处的峰宽。 6.理论塔板数： n=5.54(tR/wh/2)2 ， 一般n103 ，n越 大柱效高 进样 tR h 0.5h Wh/2 W t 第四十三页，共72页。 7.分离度