蛋白质研究的基本实验方法.pptVIP

SDS在浓缩胶运动中，Clˉ解离度大，Proˉ解离度居中，甘aaCOOˉ解离度小，迁移顺序为（PH6.8）Clˉ Proˉ —COOˉ，一个Clˉ领路，—COOˉ推动，蛋白在中间，这样就起到浓缩的作用了。 由于胶联度小，孔径大，Proˉ受阻小，因此不同的蛋白质就浓缩到分离胶之上成层，起浓缩效应，使全部蛋白质处于同一起跑线上。 当蛋白质进入分离胶时，此时Proˉ，Clˉ，甘aa 离子在PH8.8 的溶液中，Clˉ完全电离而很快到达正极，甘aa 电离度加大很快跃过蛋白质，而到达正极，只有蛋白质分子在分离胶中较为缓慢的移动。 第三十一页，共59页。 SDS由于Proˉ在电泳过程中，带负电荷多者迁移快，反之则慢，这就现了电荷效应。由于胶孔径小，而且成为一个整体的筛状结构，它们对大分子阻力大，小分子阻力小，起着分子筛效应，也就是蛋白质在分离胶中，以分子筛效应和电荷效应而出现迁移率的差异，最终达到彼此分开。 第三十二页，共59页。 SDS第三十三页，共59页。 SDS催化剂：过硫酸铵（AP）在隔氧的状态下，最好现配现用，使用新鲜的。 加速催化剂：TEMED，四甲基乙二胺。催化剂的作用是使单体聚合成网状聚合物。 第三十四页，共59页。 SDS第三十五页，共59页。 SDS上样量：总蛋白量 20-50ug（上样量过多使电泳条带变形） 70V，30min；110V，与待分离样品靶蛋白