植物磷含量测定(艾老师).pdfVIP

植物有效磷含量的测定（游离态磷） 1．试剂配制 （1） 配 100 ml l0%( w/v ) 的高氯酸，取 7.874 ml 72%的高氯酸溶液。 ( 高氯酸： 分子量 100.46，相对密度 1.764) 。配 800 ml 5%( w/v ) 的高氯酸，取 31.494 ml 72%的高氯酸溶液。 （2） 配制硫酸 -钼酸铵溶液（溶液 A ）：即 0.5N H2SO4 中含有 0.4% （w/v ）的 钼酸铵。① 溶解 0.8g 钼酸铵 (NH4 )6 Mo7O24 4H· 2O 于 100ml 水中。②然后徐 徐加入 5 ml 的浓 H SO （98%）。③充分混匀，冷却后加水至 200 ml 。 2 4 （3） 配制 10%( w/v ) 抗坏血酸溶液（溶液 B ）：溶解 2 g 抗坏血酸于水中，最后 加水至 20 ml 中，贮于棕色瓶中，在 4 ℃冰箱保存。 （4） 工作溶液：按体积比 6:1 混合溶液 A 和溶液 B 。注：工作溶液需要每天配 制， 配好后放置 2 小时后再使用。 2. 操作步骤 （1） 取 0.5 克鲜样用液氮研磨成粉末， 在 4 ℃放置 ( 冰上或者冰箱 ) 至样品冻融， 加入 1ml 10%( w/v ) 的高氯酸（ PCA ）研磨均匀。 （2） 匀浆液用 5%(w/v) 的高氯酸（ PCA）稀释 10 倍，于冰上放置 30 分钟。 （3） 于 4 ℃，10000 g离心 10 分钟，上清液用于有效磷含量的测定（钼蓝法） 。 （4） 取 2 ml 工作溶液与 1 ml 样品上清液混合，于 40 ℃温育 20 分钟。 （5） 反应液在冰上冷却后，于 820 nm 可见光波长下测定吸收值。如样品浓度 过高， 应适当稀释，使其 OD 值落在标线的线性范围内。 3．磷标准曲线的制作 （1） 磷标准溶液配制（ 60 ppm P ）：溶解 0.230 g 磷酸二氢铵（ NH H PO ）于 4 2 4 100 ml 蒸馏水中，即得 600 ppm P 的磷标准溶液，再将 600 ppm P 的磷标 准溶液用提取剂稀释 10 倍，得 60 ppm P 的磷标准溶液。 （2） 标准曲线绘制：将 60 ppm P 的标准磷溶液用提取剂稀释，分别制成 0.6、 1.2、2.4、3.6、4.8 和 6 ppm P 的标准系列溶液。提取剂用 10%( w/v ) 的高 氯酸和 5%( w/v ) 的高氯酸按体积比 1:9 混合配制。 用提取剂与工作溶液的 反应液作空白。 4. 计算 植物有效磷 ( Pi) 含量 ( mg Pi/g FW) =OD 值* ( V/m ) * ( V2/V1 ) *C OD 值 —换算后待测液中磷的质量浓度 ( PPM：mg/L ) V —样品制备溶液的 ml 数，即样品所加提取剂的体积 ( 此为 0.01 L) m — 样品鲜重 ( g)( 根据实际称得的质量计算 ) V1 — 吸取反应所用体积 ( 1 ml) V2 — 反应液总体积数 ( 3 ml) C —样品的稀释倍数 ( 如果样品浓度过高，需稀释至 1 ml 后再反应 )